インターロイキン３２の関節疾患における役割とその下流シグナルの解明

2014 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 24592280
• Research Institution: Keio University
• Principal Investigator: 二木 康夫 慶應義塾大学, 医学部, 講師 (10276298)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 中山 政憲 慶應義塾大学, 医学部, 助教 (70528249) [Withdrawn] ; 武田 勇樹 慶應義塾大学, 医学部, 助教 (20445307)
• Project Period (FY): 2012-04-01 – 2015-03-31
• Keywords: インターロイキン32 / Toll様受容体 / 変形性関節症 / 三次元培養

Outline of Annual Research Achievements

1）IL-32alphaが変形性関節症に与える影響の検討：昨年までの研究で、炎症性関節炎モデルにおいてIL-32はTLRシグナルの中でもTRIFを介した系で炎症を惹起することを明らかにした（M. Nakayama, et al . Arthritis Res Ther, 2012, Scientific Reports, 2013）。TLR-TRIF axisが変形性関節症に与える影響を検討するため、TRIFノックアウト、MyD88 ノックアウトマウスで、destabilization of medial meniscus (DMM)モデルを作製し、OAの進行度を組織学的に検討した。それぞれにおいてOAの進行が抑制されることが確認でき、TLRシグナルがOAの発症、進行に重要な役割を果たしていることが予想できた。

2）ATDC5と三次元培養組織の構築：in vitroでの検討を行うために、マウスEC（Embryonal Carcinoma）細胞由来クローン化細胞株であるATDC5をコラーゲン溶液に混和し、コラーゲンスキャフォールド（アテロコラーゲンスポンジ　MIGHTY, KOKEN）に細胞を播種し、三次元組織を作製した。ATDC5を、5%fetal bovine serum（FBS）添加DMEM培養液にて培養し、5×10 6細胞をコラーゲン溶液に混和し、コラーゲンスキャフォールドに細胞を播種させた。このATDC5細胞からなる三次元培養組織を、5%FBS添加DMEM培養液中で培養した。また、そこでさらに播種させた細胞をITS、BMP-2を添加して分化させることで軟骨細胞周囲の軟骨基質の産生を確認し、より実際の軟骨組織に近い環境で実験を行うモデルを検討した。