2012 Fiscal Year Research-status Report

新規癌関連タンパク質ＧＧＣＴを標的としたＲＮＡ干渉による尿路上皮癌治療の開発

Research Project

Project/Area Number	24592384
Research Category	Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
Research Institution	Shiga University of Medical Science
Principal Investigator	影山進滋賀医科大学, 医学部, 助教 (50378452)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	花田英紀滋賀医科大学, 医学部, 医員 (40555067) 荒木勇雄滋賀医科大学, 医学部, 准教授 (50252424) 吉貴達寛滋賀医科大学, 医学部, 客員教授 (80230704)
Project Period (FY)	2012-04-01 – 2015-03-31
Keywords	C7orf24 / GGCT / siRNA
Research Abstract	新規癌関連タンパク質ＧＧＣＴを標的としたＲＮＡ干渉による尿路上皮癌治療の開発をテーマに研究を進めており、尿路上皮癌の株細胞であるＵＭＵＣ３をモデルに用いてＧＧＣＴを標的として検討している。ＵＭＵＣ３においてＧＧＣＴを標的としたＲＮＡ干渉実験で、同分子の発現を抑制することにより細胞増殖の抑制が観察されている。これらの一連の細胞増殖抑制効果はどのようなメカニズムによるものかはまだ十分に判明しておらず、それらの解析も同時に行っている。今までの研究において、ＧＧＣＴの発現を抑制した腫瘍細胞においてはネクローシスやアポトーシスとは異なった細胞の形態変化を認めており、前立腺癌細胞モデルＰＣ３を用いた実験系ではウエスタンブロッティングでアポトーシスの際に認められるシトクロームＣ発現の増強は認めず、リアルタイムＰＣＲでもアポトーシス促進因子であるＢＡＸの発現上昇は認めず、アポトーシス阻害因子であるＢｃｌ－２の発現上昇が観察された。これらのことからＧＧＣＴの発現抑制による細胞増殖抑制効果はアポトーシスとは異なるメカニズムが示唆される結果となっている。また、現在臨床で使用されている既存の抗がん剤治療効果と、非アポトーシス性の細胞増殖抑制効果を認めるＧＧＣＴの発現抑制効果とを組み合わせることでさらなる抗がん効果が期待できることが示唆されるため、相乗効果の有無を確認する実験も進めている。尿路上皮癌以外での癌腫においてもＧＧＣＴの高発現が観察されており、白血病細胞モデルや前立腺癌細胞モデル、骨肉腫細胞モデルでも同様に同分子を標的としてＲＮＡ干渉実験を行い、それぞれの細胞モデルにおいて細胞増殖抑制効果を確認している。
Current Status of Research Progress	Current Status of Research Progress 2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned. Reason 新規癌関連タンパク質ＧＧＣＴを標的としたＲＮＡ干渉による尿路上皮癌治療の開発をテーマに研究を行っており、実際にＲＮＡ干渉で同分子を抑制することで尿路上皮癌細胞モデルでの細胞増殖抑制効果を観察できている。２４年度に実施計画を行っていた摘出標本での尿路上皮の癌組織、正常組織におけるＧＧＣＴ発現の検討研究はまだ十分に達成できていない。尿路上皮癌以外での各種癌細胞モデルにおいてもＧＧＣＴの発現増強が観察できており、現在ＲＮＡ干渉による各種癌細胞モデルでの細胞増殖抑制効果を確認している。さらに細胞増殖抑制効果の効率を上げる検討や、リポフェクション操作による細胞毒性の有無の検討も行っている。おおむね研究予定に沿って進んでいるがさらなる研鑽が必要である。
Strategy for Future Research Activity	尿路上皮癌以外の各癌腫においてＧＧＣＴの強発現が認められており、それらの発現を抑制することで各癌腫の細胞増殖抑制が観察されている。細胞増殖抑制のメカニズムはまだ十分に解明されていないため、どういったメカニズムで細胞増殖が抑制されているのかをさらに評価することを予定している。尿路上皮癌治療の開発だけにとどまらず、各癌腫でも細胞増殖抑制効果のさらなる観察を行い、治療法の開発を行うことを予定している。現在は細胞レベルでの細胞増殖抑制効果の観察にとどまっているが、研究を進め、安定して各癌腫での細胞増殖抑制を行うことができれば、いずれ動物レベルで抗癌作用を観察することも視野に入れている。尿路上皮癌の摘出標本において癌組織、正常組織中のＧＧＣTの発現レベルを定量評価し、悪性度との関連性や、病期との関連性の検討を行う。現在までに作製している数種類のｓｉＲＮＡで細胞増殖抑制効果が認められているが、さらに効率よくＧＧＣTの発現抑制効果を示すｓｉＲＮＡの構造を解明し、作製することを検討している。ＲＮＡ干渉による治療法の確立は困難であることも予想されるため、低分子化合物によるＧＧＣＴ発現抑制など、他の手技、方法での尿路上皮癌治療の開発も視野に研究を進める予定である。それらをまとめて学会発表、論文作成を行う予定である。
Expenditure Plans for the Next FY Research Funding	本研究で使用する細胞株，実験動物などの生物学的試料の購入。また，試薬およびプラスチック器具などの消耗品などの購入。研究で確認された各癌種での細胞増殖抑制効果の効率を改善する手技の確立や、新しいｓｉＲＮＡの開発、低分子化合物の開発などを予定しており、それらに研究費を使用する予定である。大型の新規機器の購入は計画していない。発表に際しての学会出張費，資料整理の研究補助者への謝金，論文投稿料等に使用する計画である。