2012 Fiscal Year Research-status Report
子宮内膜症による骨盤内炎症が卵巣予備能に及ぼす影響に関する研究
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24592475
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Research Institution | Nagasaki University |
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Principal Investigator |
北島 道夫 長崎大学, 大学病院, 講師 (50380845)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
KHAN KHALEQUE 長崎大学, 医歯(薬)学総合研究科, 助教 (60336162)
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| Project Period (FY) |
2012-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | 子宮内膜症 / 卵巣チョコレート嚢胞 / 卵巣予備能 / 妊孕性温存 / 卵巣皮質組織 / 卵胞発育 |
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| Research Abstract |
本年度は，腹腔鏡手術を受けた卵巣チョコレート嚢胞を有する女性において，疾患自身および疾患に対する外科処置が卵巣予備能に及ぼす影響を評価する目的に，腹腔鏡手術を受けた子宮内膜症および非子宮内膜症コントロールから採取した末梢血および腹水を用いて，末梢血中AMHおよび腹水中の炎症促進性サイトカイン濃度（IL-6およびTNFa）をELISA法により測定し，進行期などの子宮内膜症の臨床病理的因子やサイトカイン濃度による腹腔内炎症の程度とAMHの相関を解析した．とくに卵巣チョコレート嚢胞に対して薬物療法を施行したうえで2期的手術を受けた症例で，手術および薬物療法の前後の腹水中の炎症促進性サイトカインと末梢血中AMHの推移との関連を検討した．取得したデータは現在解析中であるが，子宮内膜症による骨盤内炎症の亢進および骨盤内臓器の癒着の進行は，末梢血AMH濃度と関連しており，これらが卵巣予備能に影響していることが推察されている．また，子宮内膜症に対する外科処置は，卵巣に対する手術操作が限定的であっても術後のAMH低下（＝卵巣予備能の低下）は避けられない可能性があることが判明しつつある．
一方，子宮内膜症女性から得られた卵巣皮質組織において，皮質に存在する初期卵胞の形態的評価を行い，チョコレート嚢胞を有する卵巣から得られた皮質組織では，初期卵胞のリクルートメントおよび閉鎖の亢進が認められた．これらは，免疫染色による卵胞顆粒膜細胞でのPCNA陽性率の亢進と一致していた．また，形態的に閉鎖していると判断された初期卵胞ではアポトーシスの調節蛋白である活性型カスパーゼ３の局在が認められた．これらの結果は，チョコレート嚢胞の形成過程において，卵巣皮質に存在する原始卵胞が消失する（＝卵巣予備能の低下）機序を解明する端緒となる知見である．
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
本年度は主に免疫組織染色とELISA法による検討を行ったが，生殖年齢（20から30代前半）の卵巣チョコレート嚢胞あるいは良性卵巣腫瘍コントロール症例で正常卵巣組織を得るためのインフォームド・コンセントの取得が困難で，検体の収集が遅れており，検体数が目標数に達していない．
子宮内膜症およびコントロール症例から採取した腹水中のマクロファージ数をフローサイトメトリーで解析する予定であったが，フローサイトメーターの調整がうまくいってないためか満足のいく結果が得られていない．
ひとまずELISA法および免疫組織化学的手法による解析を優先して行い，機器の調整を行いつつ実験を行っていく予定である．
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| Strategy for Future Research Activity |
腹腔鏡手術を施行する子宮内膜症症例およびコントロール症例の末梢血・腹水および卵巣組織の収集に努め，検体数の増加を図る．
子宮内膜症およびコントロール症例から得られた腹水および末梢血の追加検体において，ELISA法によりAMH, IL-6およびTNFa濃度を測定する．
フローサイトメーターおよびLaser Capture Microdisection (LCM) 機器の整備を行う．
LCMのための凍結保存卵巣組織検体を得るため，対象症例からインフォームドコンセントを得て組織片を採取できるよう務める．
卵巣皮質組織においてLCM行う場合，非常に微細な組織から極少量の組織を切り出してmRNAを抽出するため，その後のRT-qPCRなどの解析に耐えうる質の高いmRNAを得ることが困難な場合がある（私どもは子宮内膜症モデルマウスの子宮内膜症病変でのmRNA発現をLCMで検討した際にこれらを経験している）．このため，LCMがうまくいかない場合は，子宮内膜症およびコントロール症例から収集した皮質組織のwhole tissue sampleから直接mRNAの抽出を行いMMPs, TGFb, BAX, Bcl2およびVEGFのmRNAの発現をRT-qPCRで定量解析を行う予定である．．
また，皮質組織でのMMPs, TGFb, BAX, Bcl2およびVEGF蛋白発現を免疫組織化学的手法により検討する．
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| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
AMH, IL-6およびTNFaのELISAキットおよびMMPs, TGFb, BAX, Bcl2およびVEGFの免疫染色用の1次抗体を購入する予定である．
MMPs, TGFb, BAX, Bcl2およびVEGFなどのRT-qPCR用のprobeを購入予定である．
フローサイトメトリー，免疫染色およびRT-qPCRに必要な薬液やプラスチックなどの消耗品を購入予定である．
研究内容の発表と意見交換のためにいくつかの学会に出席する予定である．
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