2013 Fiscal Year Research-status Report
幼若象牙芽細胞に発現するＯｓｔｅｒｉｘの細胞分化における機能解析
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24592785
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| Research Institution | Matsumoto Dental University |
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Principal Investigator |
細矢 明宏 松本歯科大学, 歯学部, 講師 (70350824)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
中村 浩彰 松本歯科大学, 歯学部, 教授 (50227930)
平賀 徹 松本歯科大学, 歯学部, 准教授 (70322170)
雪田 聡 静岡大学, 教育学部, 講師 (80401214)
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| Keywords | Osterix / 象牙芽細胞 |
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| Research Abstract |
象牙芽細胞分化過程におけるOsterixタンパク質の局在を検討し，分化直後の象牙芽細胞には局在がみられるが，その後局在が消失することを明らかにした（Histochem Cell Biol, 140:201-21, 2013）。そこで， Osterix局在の時期および部位が象牙芽細胞分化に重要であると考え，歯髄腔内の骨組織形成モデル実験におけるOsterix局在を検討した。GFP発現ラット臼歯を抜歯し，ただちに野生型ラット腹部皮下へ他家移植した。5-40日後に移植歯を周囲組織と共に取り出し，免疫組織化学的手法にてα-平滑筋アクチン，OsterixおよびGFPの局在を観察した。移植5日後，歯髄上部に壊死が生じ典型的な象牙芽細胞は消失したが，根尖部の象牙質に接して多数の細胞を封入した新生硬組織が認められた。10日後，壊死組織の回復とともに，歯冠部歯髄で島状に線維性骨様組織が形成された。20日以降，根尖部および歯冠部歯髄に形成された硬組織は量を増し，組織学的に骨様を呈した。幹細胞および前駆細胞マーカーの一つであるα-平滑筋アクチンは，移植10日後の歯冠部歯髄において多数の陽性細胞が観察された。Osterixは，10日後から根尖部および歯冠部歯髄の骨芽細胞様細胞で観察され，この反応は40日後においても同様に認められた。歯の細胞由来であることを示すGFPは，骨芽細胞様細胞で陽性を示した。以上から，皮下移植後の歯髄腔内に形成される骨様組織は，歯髄組織に由来することが明らかとなった。また，歯髄由来の骨芽細胞様細胞は，分化が進んでもOsterixを発現し続けることが示された。従って，Osterix局在の消失が骨芽細胞系細胞から象牙芽細胞への分化に重要であると考えられた。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
平成25年度は歯髄由来細胞の骨芽細胞分化過程におけるOsterix局在を検討し，得られた所見について学会発表を行った（平成25年度歯科基礎医学会，春期歯科保存学会，国際骨代謝学会）。現在予定通り象牙芽細胞特異的Osterixトランスジェニックマウスを作製し，15系統のマウスラインを得たところである。今後，その表現系を検討する予定であり，概ね順調に研究が進行していると考えている。
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| Strategy for Future Research Activity |
Osterixトランスジェニックマウスは15系統得ている。今後は，これらマウス下顎の未固定非脱灰凍結切片を作製し，GFP蛍光観察によりOsterixの強制発現部位を確認する予定である。本研究に用いるラットDSPプロモーターは，トランスジェニックマウス作製時に象牙芽細胞特異的に機能することが報告されていることから，通常は発現が減弱する成熟象牙芽細胞でOsterixが強制発現している状態を検討できると考えている。解析は，象牙質基質を組織学的ならびに免疫組織化学的に観察し，基質形成量を形態計測的手法により評価する。
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| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
トランスジェニックマウスのgenotypingに必要な物品であるKAPA MG Kit 100回用（日本ジェネティクス，KK7153，定価34,000円）を当初購入する予定であったが，次年度4月以降の販売キャンペーン期間を待って大容量の製品を安価で購入することとした。また産仔の成長から実験は5月初旬の予定となり，購入を遅くしたことで実験に支障は生じていない。
次年度使用額である33,523円は，平成26年度の物品費と合わせてKAPA MG Kit 500回用（日本ジェネティクス，KK7154，キャンペーン価格112,500円）の購入に使用する。
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Research Products
(7 results)
