2013 Fiscal Year Research-status Report
POCTとして唾液中亜鉛結合タンパク質を指標とした迅速な味覚障害評価法の臨床応用
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24592928
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Research Institution | Iwate Medical University |
Principal Investigator |
島崎 伸子 岩手医科大学, 歯学部, 研究員 (30337258)
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Keywords | 味覚 / 亜鉛 / 炭酸脱水酵素 / イムノクロマト / 味覚障害 / 唾液 / 耳下腺唾液 / gustin |
Research Abstract |
【目的】耳下腺唾液中37kDa亜鉛結合タンパク質である炭酸脱水酵素(CA)VI型(Gustin)が味覚機能に関与するとの報告に基づき、CAVIに対する抗体を作製し、ELISAによるCAVI濃度を検出する方法を確立した。現在まで、味覚障害患者のCAVI濃度は、健常者の3分の1程度で、亜鉛内服治療による味覚障害の症状の変化とCAVI濃度の推移の比較検討を行ってきた。イムノクロマト法を用い、味覚障害患者に対してチェアーサイドにて簡便・迅速に使用できる体外診断薬を確立することを目的とし、唾液を検体としたイムノクロマト測定値と血清亜鉛値との関連について検討した。 【方法】1.イムノクロマト法による測定:味覚障害を主訴として冨田耳鼻咽喉科を訪れた患者の耳下腺唾液を採取しサンプルとした。被験者に対しては説明を行い、インフォームドコンセントを得て、個人を特定できないよう配慮し研究を施行した。味覚閾値測定を四基本味の濾紙ディスク法にて施行し、あわせて血清亜鉛値を測定した。金コロイド溶液は40 nm、メンブレンはHi-Flow Plus120、テストライン用抗体はヒトCAVIの合成ペプチドに対して作製した抗体(Rabbit-IgG)、コントロール用抗体はSwine anti-rabbit IgG抗体を用いた。またライン発色はイムノクロマトリーダにて測定した。2.血清亜鉛値との比較:唾液サンプルをPBS(-)で4倍に調整し、抗体感作金コロイド溶液と混合し、サンプルとした。それぞれイムノクロマトリーダにて測定した後、イムノクロマト測定値と血清亜鉛値の相関を調べた。 【結果と考察】味覚障害者の発色反応を計測したイムノクロマト測定値と血清亜鉛値との間には、有意な正の相関(R=0.398、P<0.05)が認められた。すなわち、唾液サンプル中にCAVIが少ない場合は発色反応が薄くなり、味覚障害の可能性があることになる。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
平成25年度は、味覚障害患者の耳下腺唾液をサンプルとしてイムノクロマトと血清亜鉛値の相関を調べることにより、有用性を検討した。 近年、簡便・迅速に検査結果を得るために、POCT(poin of care testing)が急速に普及し、その役割が高まりつつある。しかし、医療現場において血清亜鉛値の測定やELISAは時間を要する。イムノクロマト法はAnalyteが毛細管現象により多孔質支持体内を移動することを応用した免疫測定方法で、検体に含まれる抗原の有無を10分程で診断することが可能である。すなわち、唾液サンプル中にCAVIが少ない場合は発色反応が薄くなり、味覚障害の可能性があることになる。 CAの味覚機能へ関与についての駒井らによる一連の報告があることからも、耳下腺唾液中亜鉛結合タンパク質の測定は,亜鉛欠乏性味覚障害の診断の根拠になりうるものと考える。今後被験者数を増やし、さらなる詳細な検討を実施する予定である。
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Strategy for Future Research Activity |
現在行っているイムノクロマト法はハーフストリップ法であり、データを構築するには、さらなる被験者を増やし、イムノクロマト法の完成を目指すことが必須である。被験者も味覚障害、健常者、義歯装着者など各々の状態や段階も増やしていく予定である。それに対しては他分野や他講座の協力も現在進めている状況である。 平成26年度後半は採取した実験データの解析のまとめも行い、研究成果を味と匂学会など関連学会にて報告し、論文は専門学会誌に投稿を行う予定である。
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Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
年度末にディープフリーザーが壊れ、保存していた抗体等の一部を失ったため、急遽次年度に繰り越しをしました。 イムノクロマトに使用する抗体や合成ペプチドを購入予定
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Research Products
(2 results)