2014 Fiscal Year Annual Research Report
プロテオーム解析に基づいた新規３次元培養モデルによる口腔癌浸潤能の検討
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24593066
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| Research Institution | Nihon University |
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Principal Investigator |
小宮山 一雄 日本大学, 歯学部, 教授 (00120452)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
松本 直行 日本大学, 歯学部, 助教 (20386080)
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| Project Period (FY) |
2012-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | 口腔癌 / 初期浸潤 / ptoteome / ３次元培養 / SLPI / NUSD-1 / MMP / TIMP |
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| Outline of Annual Research Achievements |
癌の制御は，初期浸潤癌を制御することにある。とくに口腔癌では，病変を直視できるにも関わらず，制御が困難となることも多い。癌の増殖および浸潤のメカニズム未だ不明な点が多い。本研究では、ヒト正常粘膜上皮、上皮異形成、CISおよび浸潤癌の，各組織から上皮成分を切除してプロテオーム解析を行い，癌への進行に伴い変動する412因子のデータベースを構築した。それらの中で今回は特に、ケラチン、HSP、ラミン/ C、デスモプラキン、MMPおよびプレクチン-1に注目した。これらは、いずれもタンパク質レベルで上昇していた。ついで癌の初期浸潤癌における因子を検証するために、口腔扁平上皮癌細胞株Ca9およびヒト筋腫組織を使用して3Dの癌浸潤モデルを開発した。癌の初期浸潤を制御することを考え，Ca9のserin protease inhibitor遺伝子をノックダウンした細胞株NUSD-1を作製した。このNUSD-1はは，Ca9と異なり筋腫内に浸潤を示さなかった。この口腔癌浸潤モデルをつかって，proteome解析で変動が大きく，癌浸潤をコントロールすると考えられるMMPの発現を検討したところ，Ca9にはMMP2,9の発現をみたが，NUDSD-1では発現が見られなかった。さらにTIMPの発現はCa9ではTIMP-1がわずかに発現するのみで，NUDSD-1ではTIMP-1,-2,-4が強発現していた。さらにMMPインヒビターを加えると浸潤が見られないことも確認した。ついでケラチンについて，観察するとCaではCK17が高発現していたが，NUSD-1では発現が見られなかった。NUSD-1は未刺激では浸潤能を示さないが，SLPIあるいはTGFβで刺激し長期間培養すると，わずかに浸潤を示した。この時の両細胞のケラチン発現に変化を認めなかった。以上の結果、口腔癌初期浸潤における応答性の要因としてMMP2、MMP9およびTIMP考えられ，これらの因子の発現パターンは、腫瘍の浸潤を制御することを示した。
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