2012 Fiscal Year Research-status Report
昆虫ポックスウイルスのゲノム外ＤＮＡ断片はヴィロファージか
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24657064
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| Research Institution | Forestry and Forest Products Research Institute |
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Principal Investigator |
高務 淳 独立行政法人森林総合研究所, 森林昆虫研究領域, 主任研究員 (80399378)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
仲井 まどか 東京農工大学, (連合)農学研究科(研究院), 准教授 (60302907)
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| Project Period (FY) |
2012-04-01 – 2014-03-31
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| Keywords | 進化 / ウイルス |
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| Research Abstract |
ウイルス学的、生態学的、進化学的に興味深いヴィロファージ（Virophage：ウイルスに
寄生するウイルス)に似た構造と配列を持つDNA 断片を、昆虫ポックスウイルスのゲノム外
DNA 断片として発見した。このゲノム外DNA 断片がvirophage である可能性を検討する。
本年度は、ゲノム外ＤＮＡ断片を検出する手法を開発すること、組織学的に解析し、本断片の存在場所と存在様式(（ウイルス粒子として存在するのか、粒子という形状を持たないのか）を明らかにすることを目的とした。
既に得ているゲノム外ＤＮＡ断片のＤＮＡ配列から特異的なＰＣＲ用プライマーを設計した。また、特異的プローブを作成し、サザンハイブリダイゼーションを行い、電気泳動で期待されるサイズに本断片が昆虫ポックスウイルスゲノムと完全に分離された状態で検出されることを確認した。
昆虫ポックスウイルスは、包埋体と呼ばれるタンパク性のカプセルを形成し、多数のウイルス粒子が包埋体に包まれる構造をしている。そこで、精製したウイルス粒子からＤＮＡを精製した場合と、包埋体から直接精製した場合とで、ハイブリダイゼーションのシグナル強度を比較した結果、双方で差がなかった。また、精製したウイルス粒子を電子顕微鏡で観察したところ、昆虫ポックスウイルスのウイルス粒子以外の粒子は観察されなかった。これらのことから、本断片は、ウイルス粒子としての形状を持たず、昆虫ポックスウイルスのウイルス粒子内に存在することが示唆された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
本年度の目的は、組織学的な解析を行い、ゲノム外ＤＮＡ断片の存在場所と存在様式、すなわち、ウイルス粒子として存在するのか、粒子という形状を持たないのかを明らかにすることであったが、昆虫ポックスウイルスのウイルス粒子内に存在すること、また、ウイルス粒子としての形状をもたないことが強く示唆される結果を得ており、ほぼ計画通りに進行していると判断されるため。
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| Strategy for Future Research Activity |
研究は、研究計画に沿って推進していく方針であり、ゲノム外ＤＮＡ断片の複製と昆虫ポックスウイルスの複製について解析する。
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| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
年度末の物品購入時に予期しない値引きがあり、次年度使用額３６円が生じたが、研究は概ね順調に進行しており、物品費として適切に使用する予定である
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