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2013 Fiscal Year Annual Research Report

高分子量蛋白質の新規NMR構造解析法の開発とフロリゲン受容体への応用

Research Project

Project/Area Number 24657074
Research InstitutionOsaka University

Principal Investigator

児嶋 長次郎  大阪大学, たんぱく質研究所, 准教授 (50333563)

KeywordsNMR / 構造生物学 / フロリゲン
Research Abstract

平成25年度は平成24年度に引続き技術開発とフロリゲン受容体の構造解析に関する、(1)高感度13C直接観測法の開発、(2)13C帰属法、13Cの核間距離情報取得法、構造計算法の開発、(3)フロリゲン受容体の構造解析を進め、(4)抑制型フロリゲン受容体複合体の立体構造解析を可能にする手法の開発に取り組んだ。
(4)抑制型フロリゲン受容体複合体の立体構造解析のための手法開発:分子量10万の抑制型フロリゲン受容体複合体の構造決定は機能解析に必須である。そこで、まず抑制型フロリゲン受容体複合体の構成因子(抑制型フロリゲン、受容体、転写因子)のNMR測定を行い、抑制型フロリゲンと転写因子で良好な 1H-15N HSQC スペクトルが得られた。これらについては、溶液NMRの常法によって構造解析に取り組んだ。受容体については重水素化することで、良好な1H-15N TROSY HSQC スペクトルが得られたため、TROSY 法をベースとした帰属のための三重共鳴実験を行った。また、構成因子を個別に安定同位体標識し、複合体形成による立体構造変化とNMR滴定実験による結合部位の決定を進めた。その結果、受容体における活性型フロリゲンと抑制型フロリゲンの結合部位が同じであること、結合が競合することなどが明らかとなった。

  • Research Products

    (6 results)

All 2014 2013

All Journal Article (5 results) (of which Peer Reviewed: 5 results) Presentation (1 results) (of which Invited: 1 results)

  • [Journal Article] Purification, crystallization and preliminary X-ray crystallographic analysis of a rice Rac/Rop GTPase, OsRac12014

    • Author(s)
      Kosami K
    • Journal Title

      Acta Cryst.

      Volume: F70 Pages: 113-115

    • DOI

      10.1107/S2053230X13033645

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] The structure of metallo-DNA with consecutive T-HgII-T base-pairs explains positive entropy for the metallo-base-pair formation2014

    • Author(s)
      Yamaguchi H
    • Journal Title

      Nucleic Acids Res.

      Volume: 42 Pages: 4094-4099

    • DOI

      10.1093/nar/gkt1344

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] 1H, 15N and 13C resonance assignments of the conserved region in the middle domain of S. pombe Sin1 protein2014

    • Author(s)
      Kataoka S
    • Journal Title

      Biomol NMR Assign

      Volume: 印刷中 Pages: 印刷中

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Structure and function of florigen and the receptor complex2013

    • Author(s)
      Ken-ichiro Taoka, Izuru Ohki, Hiroyuki Tsuji, Chojiro Kojima and Ko Shimamoto
    • Journal Title

      Trends Plant Sci.

      Volume: 18 Pages: 287-294

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Formation of the T-HgII-T Metal-Mediated DNA Base Pair; Proposal and Theoretical Calculation of the Reaction Pathway2013

    • Author(s)
      Sebera
    • Journal Title

      Chemistry

      Volume: 19 Pages: 9884-9894

    • DOI

      10.1002/chem.201300460

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] Sensitivity-enhanced protein NMR techniques developed for ultra-high field NMR2013

    • Author(s)
      Kojima C
    • Organizer
      The 4th Symposium on Structure and Folding of Disease Related Proteins
    • Place of Presentation
      Seoul National University(韓国)
    • Year and Date
      20130705-20130705
    • Invited

URL: 

Published: 2015-05-28  

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