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2013 Fiscal Year Annual Research Report

エネルギー変換ユニットの活性を制御する動的構造変換

Research Project

Project/Area Number 24657087
Research InstitutionNagoya University

Principal Investigator

小嶋 誠司  名古屋大学, 理学(系)研究科(研究院), 准教授 (70420362)

Keywords細菌べん毛 / モーター / 膜タンパク質 / 構造変化
Research Abstract

細菌べん毛モーターにおいてエネルギー変換を担う固定子は、回転子周囲の適切な場所に十数個配置され機能する。ビブリオ菌のPomA/PomB固定子複合体は、モーターに集合するとPomBのペリプラズム領域に構造変化が生じて固定され、同時にイオン透過能が活性化すると考えられている。しかし本当に機能に必須な構造変化が生じているのかは不明である。本研究では、精製固定子をリポソーム上に再構成し、PomBの結晶構造から予測される構造変化部位に、局所環境変化により蛍光強度を変化させるプローブを導入して、構造変化の検出を試みることを最終目標に行ってきた。平成25年度は、前年度に改良したPomA/PomB固定子複合体の精製法により得た精製標品を用いて、リポソームへの再構成を試みた。今回は他の輸送体において成功例の多い、脂質と界面活性剤が混合したリポソームを用いる方法に着目した。この方法では、脂質混合リポソームの形成を溶液の吸光度により検出できるため、前年度に比べて定量性と再現性において向上が見られ、様々な界面活性剤を試すことによって、順方向に固定子が再構成されたプロテオリポソームを得ることが出来た。しかし残念ながら、この再構成リポソームを用いてもイオン透過活性の検出は出来なかった。従って、機能を保持した状態での再構成には成功していない。一方固定子の固定に伴うPomBのペリプラズム領域(PomBC)の構造変化については、この領域における詳細なジスルフィド架橋実験により検証を行い、PomBCの第1ヘリックスのN末端が構造変化を誘起する可能性を示唆する結果を得た。現在、固定子のリポソームへの再構成系の確立に全力を尽くしている。機能的再構成が可能になれば、ジスルフィド架橋実験で明らかになった情報をもとに、蛍光ラベルの導入と構造変化の検出に取り組む予定である。

  • Research Products

    (7 results)

All 2014 2013

All Journal Article (3 results) (of which Peer Reviewed: 3 results) Presentation (4 results) (of which Invited: 1 results)

  • [Journal Article] Contribution of Many Charged Residues at the Stator-Rotor Interface of the Na+-driven Flagellar Motor to Torque Generation in Vibrio alginolyticus2014

    • Author(s)
      Norihiro Takekawa
    • Journal Title

      Journal of Bacteriology

      Volume: 196 Pages: 1377-1385

    • DOI

      10.1128/JB.01392-13

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Construction of functional fragments of the cytoplasmic loop with the C-terminal region of PomA, a stator component of the Vibrio Na+ driven flagellar motor2014

    • Author(s)
      Yasuhiro Onoue
    • Journal Title

      Journal of Biochemistry

      Volume: 155 Pages: 207-216

    • DOI

      10.1093/jb/mvt115

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Biophysical characterization of the C-terminal region of FliG, an essential rotor component of the Na+-driven flagellar motor2014

    • Author(s)
      Mizuki Gohara
    • Journal Title

      Journal of Biochemistry

      Volume: 155 Pages: 83-89

    • DOI

      10.1093/jb/mvt100

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] Na+駆動型細菌べん毛モーター固定子の機能的集合と構造変化2014

    • Author(s)
      小嶋誠司
    • Organizer
      2013年度生物物理学会中部支部会
    • Place of Presentation
      岡崎カンファレンスセンター
    • Year and Date
      20140306-20140306
  • [Presentation] Assembly-coupled activation mechanism of the Na+-driven stator complex2014

    • Author(s)
      Seiji Kojima
    • Organizer
      Gordon Research Conference (Sensory Transduction in Microorganisms
    • Place of Presentation
      Ventura Beach Marriott, Ventura, CA, USA
    • Year and Date
      20140114-20140114
    • Invited
  • [Presentation] Structure-function analyses of the large conformational change required for the stator activation and assembly in the bacterial flagellar motor2013

    • Author(s)
      Seiji Kojima
    • Organizer
      8th Asian Biophysics Association Symposium
    • Place of Presentation
      Ramada Plaza Hotel, Jeju, Korea
    • Year and Date
      20130526-20130529
  • [Presentation] Na+駆動型べん毛モーター固定子タンパク質PomBの機能に重要なペリプラズム側構造変化の解析2013

    • Author(s)
      小嶋誠司
    • Organizer
      第77回日本生化学会中部支部会
    • Place of Presentation
      名古屋大学/理学南館坂田・平田ホール
    • Year and Date
      20130525-20130525

URL: 

Published: 2015-05-28  

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