Ｌｙｓｉｎｉｂａｃｉｌｌｕｓコレクションの整備と新規生物農薬の開発

2012 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 24658073
• Research Category: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• Research Institution: The University of Tokyo
• Principal Investigator: 小柳津 広志 東京大学, 生物生産工学研究センター, 教授 (70177301)
• Project Period (FY): 2012-04-01 – 2015-03-31
• Keywords: Lysinibacillus / 菌株コレクション

Research Abstract

本研究は、国内のさまざまな地域の水田などから昆虫死体を多数収集して、これらの腸管から耐熱性を示すLysinibacillus様菌株を分離する。分離された菌株を飼育されたショウジョウバエに噴霧することにより、半翅目に対する殺虫効果を確認する。半翅目に対して強い殺虫効果を示す菌株の結晶性タンパク質の遺伝子配列をすでに知られている鱗翅目に有効なCryタンパク質などに基づいて設計されたプライマーを使用して解読し、アミノ酸配列のデータベースを確立する。これらの菌株で鞘翅目など鱗翅目以外の昆虫に広い殺虫スペクトルを示す菌株を選別し、生物農薬として使用する系統を確立することを目指している。さらに、将来的にはこの菌株を資材化と毒素タンパク質の一部をイネにペプチドが発現されるような形で導入して、耐虫性系統の作出を目指している。
今年度は東京大学学内の管理的な仕事のため長期出張ができなかったため、東京近県より昆虫を採取した。昆虫は双翅目、半翅目を中心に約500個体を採取し、次にこれらを80度で10分加熱して耐熱胞子を生成する細菌だけを選別した。昆虫をホモジェナイザーで摩砕して耐熱性細菌をでんぷんを含むNB寒天培地で培養した。この結果、約200株の耐熱細菌を分離した。これらの細菌から培養性状と顕微鏡観察によってLysinibacillus属細菌と判定される細菌を約100株選別した。選別した細菌の16SrRNA部分配列の解読によって、最終的に約50株がLysinibacillus属であることが確認された。16SrRNA配列において、従来まで確認されているこの属の多様性を確認した。取得された菌株はグリセロールを50％になるように加えて-80℃で保存した。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

平成25年度は所属する専攻の主任をしていたため、出張が自由にできなかった。この研究では、昆虫を採取することが作業の中心となるため、多くの昆虫の採取ができなかったため、進捗はやや遅れている状況である。平成26年度は学内の管理的な仕事がないため、前年の遅れをとり戻すつもりである。

Strategy for Future Research Activity

今年度は昆虫の採取を日本全国で行い、2000個体程度の収集を行う予定である。また、すでに分離されたLysinibacillus属細菌については、結晶性タンパク質の確認とこれらのアミノ酸配列の解読を進める。

Expenditure Plans for the Next FY Research Funding

前年度は学内の管理的仕事のため長期間にわたる昆虫採取旅行ができなかったため、次年度繰越金が生じた。残額は主として旅費として使用し、一部は培地を中心とした試薬の購入に使用する。