2014 Fiscal Year Annual Research Report
| Project/Area Number |
24658085
|
|---|
| Research Institution | Osaka Prefecture University |
|---|
Principal Investigator |
片岡 道彦 大阪府立大学, 生命環境科学研究科(系), 教授 (90252494)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2012-04-01 – 2015-03-31
|
| Keywords | 微生物 / 応用微生物 / 酵素 |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
本研究では、炭素二重結合を持つ化合物の変換反応の探索により見出したアクリル酸水和活性を持つ２種の微生物について、本水和反応の基礎的な機能解析を行い、水和・脱水反応を用いた光学活性化合物やアクリル酸の生産への基礎的な検討を進めた。前年度までの検討で、アクリル酸から3-ヒドロキシプロピオン酸（3HPA）への変換がアクリリルCoAおよび3-ヒドロキシプロピオニルCoA（3HP-CoA）を介しての反応であることが示唆された。そこで、まず初めにSulfolobus tokodaii由来の3HP-CoAシンテターゼを用いて、アクリリルCoAと3HP-CoAを分析用の標準品として合成した。次に、アクリル酸とアセチルCoAを基質として、２種のアクリル酸水和変換微生物の無細胞抽出液を用いた変換反応を行った結果、アセチルCoAの消費、アクリリルCoAと3HP-CoAの蓄積、さらに3HPAの生成が見られた。これらの結果から、両菌株ともアクリル酸から3HPA への水和変換経路中に、それぞれのCoA体が存在することが証明された。次に、アクリリルCoA、3HP-CoA、3HPAの生成を酵素活性の指標として、DEAE担体を用いた陰イオン交換バッチクロマトグラフィーとMonoQを用いた陰イオン交換カラムクロマトグラフィーによる酵素精製を行った結果、それぞれの菌株で活性の高いタンパク質画分を獲得することができた。この画分中には、推定経路中の３つの触媒活性、すなわちアセチルCoAからアクリル酸へのCoA転移活性、アクリリルCoAから3HP-CoAへの水和活性、3HP-CoAから3HPAへのCoA脱離活性が存在することが明らかとなった。
|
