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2014 Fiscal Year Research-status Report

マイクロRNAによる樹状突起スパインの形態制御機構

Research Project

Project/Area Number 24659093
Research InstitutionTokyo Metropolitan Institute of Medical Science

Principal Investigator

山形 要人  公益財団法人東京都医学総合研究所, 脳発達・神経再生研究分野, プロジェクトリーダー (20263262)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 田中 秀和  立命館大学, 生命科学部, 教授 (70273638)
Project Period (FY) 2012-04-01 – 2016-03-31
KeywordsマイクロRNA
Outline of Annual Research Achievements

1)脳特異的miRNAノックアウトマウスにおけるスパイン形態:野生型とmiRNA KOマウスの脳を潅流固定し、その脳切片へDiIをコートした金粒子を撃ち込むことにより、海馬CA1ニューロンを可視化した。これらのニューロンの樹状突起を共焦点顕微鏡を用いて撮像し、樹状突起スパイン形態をKOマウスと野生型の間で定量的に比較した。しかし、miRNA KOマウスと野生型の間で有意なスパインの形態変化は認められなかった。
2)脳特異的miRNAノックアウトマウスの行動学的解析:miRNA KOマウスの脳内において、arcの発現量が増加していることを既に確認している。そこで、miRNA KOマウスと野生型マウスを用いて、文脈依存的恐怖記憶試験を行った。しかしながら、KOマウスと野生型の間で有意な記憶の差は認められなかった。以上の結果から、arcが正常より増加してもスパイン形態や記憶に有意な影響を及ぼさないと考えられた。
3)arcによるユビキチンリガーゼ活性の制御:ユビキチンリガーゼの標的分子の同定を試みる前に、arcによってユビキチンリガーゼ活性が制御されるかどうかを検討した。しかしながら、arcを共発現してもリガーゼ活性に有意な変化は認められなかった。そこで、arcがこのリガーゼの基質であるかどうかを確かめることとし、研究期間を延長した。
4)arcと結合するユビキチンリガーゼのKOマウスを作製中である。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

miRNA KOマウスにおいて、arcが増加してもスパイン形態や記憶に有意な変化は見られなかった点は予想外であった。しかし、arcと結合するユビキチンリガーゼのKOマウス作製が進んでいるため、今後はこのマウスを用いた新しい解析結果が期待できる。

Strategy for Future Research Activity

Arcがユビキチンリガーゼによってユビキチン化されるかどうかをin vitroあるいは細胞を用いた実験によって検討する。また、作製中のユビキチンリガーゼKOマウスを用いてin vivoでも検証する。

Causes of Carryover

平成26年度にArcによるユビキチンリガーゼ活性制御のメカニズムを解析する予定であったが、arcを共発現してもユビキチンリガーゼ活性が変化しないことがわかった。そこで計画を変更し、arcがユビキチンリガーゼの基質である可能性を検証することとした結果、未使用額が生じた。

Expenditure Plan for Carryover Budget

Arcがユビキチンリガーゼによってユビキチン化されるかどうかを次年度解析することとし、未使用額をその経費に充てることにしたい。Arcとリガーゼ蛋白質の調整に必要な試薬(20万円)、in vitroユビキチン化に必要な試薬(40万円)、培養細胞を用いたユビキチン化に必要な試薬と器具(20万円)、ユビキチン抗体とarc抗体(20万円)など、すべて物品費に充てる予定である。

  • Research Products

    (8 results)

All 2015 2014

All Journal Article (3 results) (of which Peer Reviewed: 3 results,  Acknowledgement Compliant: 3 results,  Open Access: 2 results) Presentation (5 results)

  • [Journal Article] Rheb activation disrupts spine synapse formation through accumulation of syntenin in tuberous sclerosis complex2015

    • Author(s)
      Hiroko Sugiura, Shin Yasuda, Shutaro Katsurabayashi, Hiroyuki Kawano, Kentaro Endo, Kotaro Takasaki, Katsunori Iwasaki, Masumi Ichikawa, Toshiyuki Kobayashi, Okio Hino and Kanato Yamagata
    • Journal Title

      Nature Communications

      Volume: 6 Pages: 6842

    • DOI

      10.1038/ncomms7842

    • Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
  • [Journal Article] Role of inflammatory mediators in the pathogenesis of epilepsy.2014

    • Author(s)
      Shimada T, Takemiya T, Sugiura H, Yamagata K
    • Journal Title

      Mediators Inflamm.

      Volume: 2014 Pages: 901902

    • DOI

      10.1155/2014/901902

    • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
  • [Journal Article] Activation of Rheb, but not of mTORC1, impairs spine synapse morphogenesis in tuberous sclerosis complex.2014

    • Author(s)
      Yasuda S, Sugiura H, Katsurabayashi S, Shimada T, Tanaka H, Takasaki K, Iwasaki K, Kobayashi T, Hino O, Yamagata K
    • Journal Title

      Sci Rep

      Volume: 4 Pages: 5155

    • DOI

      10.1038/srep05155

    • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
  • [Presentation] 結節性硬化症におけるmTORC1非依存的スパイン形態制御2014

    • Author(s)
      山形要人、安田新、杉浦弘子、島田忠之、桂林秀太郎、岩崎克典、小林敏之、樋野興夫
    • Organizer
      第131回日本薬理学会関東部会
    • Place of Presentation
      横浜市立大学(神奈川県横浜市)
    • Year and Date
      2014-10-11 – 2014-10-11
  • [Presentation] Novel mechanism for the pathogenesis of tuberous sclerosis complex.2014

    • Author(s)
      Yamagata K, Sugiura H, Yasuda S, Shimada T, Katsurabayashi S, Takemiya T, Iwasaki K, Kobayashi T, Hino O
    • Organizer
      第48回日本てんかん学会学術集会
    • Place of Presentation
      京王プラザホテル(東京都新宿区)
    • Year and Date
      2014-10-02 – 2014-10-03
  • [Presentation] Activation of Rheb, but not of mTORC1, impairs spine synapse morphogenesis in tuberous sclerosis complex.2014

    • Author(s)
      Yasuda S, Sugiura H, Katsurabayashi S, Shimada T, Tanaka H, Takasaki K, Iwasaki K, Kobayashi T, Hino O, Yamagata K
    • Organizer
      第36回日本生物学的精神医学会・第57回日本神経化学会大会合同年会
    • Place of Presentation
      奈良県文化会館(奈良県奈良市)
    • Year and Date
      2014-09-29 – 2014-10-01
  • [Presentation] Neuritin induces activity-dependent axonal branch formation through FGF signaling.2014

    • Author(s)
      Shimada T, Yoshida T, and Yamagata K
    • Organizer
      第37回日本神経科学大会
    • Place of Presentation
      パシフィコ横浜(神奈川県横浜市)
    • Year and Date
      2014-09-11 – 2014-09-13
  • [Presentation] Neuritin mediates activity-dependent axonal branching in hippocampal granule cells.2014

    • Author(s)
      Shimada T, Yoshida T and Yamagata K.
    • Organizer
      Joint Meeting of the 20th Biennial Meeting of the International Society for Developmental Neuroscience and the 5th Annual NeuroDevNet Brain Development Conference
    • Place of Presentation
      モントリオール(カナダ)
    • Year and Date
      2014-07-19 – 2014-07-24

URL: 

Published: 2016-06-03  

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