2013 Fiscal Year Annual Research Report
シグナル応答性を指標とした造血幹細胞の新たな細分画法の確立
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24659127
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
大津 真 東京大学, 医科学研究所, 准教授 (30361330)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
片山 佳樹 九州大学, 工学(系)研究科(研究院), 教授 (70284528)
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| Keywords | 造血幹細胞 / シグナル応答性プローブ |
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| Research Abstract |
大津は前年度に引き続き標的細胞へのプローブ導入に備え、造血幹細胞におけるシグナル伝達様式の解析、細胞表面マーカーによる分画および、幹細胞機能評価法の至適化を行った。特にIL-1/IL-1R、SDF-1/Cxcr4シグナルに着目し、後者においてはレセプター改変後の細胞におけるシグナル分子のリン酸化を評価した。その結果、本研究課題が究極に目指す高品質の造血幹細胞分取に向けて、従来考えられてきたAKTではなく、ERKリン酸化のキネティックスがより幹細胞機能と相関する可能性が示された。片山は高分子イオン錯体型の蛍光プローブの開発を検討した。内部標準としてCy5を濃度消光が起きない程度、カチオン性基質ペプチドを側鎖に有するデキストランに導入し、一方、キナーゼ応答型の蛍光を与えるためのTAMRAをポリアスパラギン酸に導入したポリマーも合成して両者を混合し、ポリイオン錯体型ナノ粒子を調製した。得られたナノ粒子はCy5の蛍光はナノ粒子形成によっても不変であったが、TAMRAの蛍光は大きく消光した。一方、標的キナーゼでデキストラン側鎖の基質ペプチドをリン酸化するとTAMRAの蛍光は大きく回復し、Cy5の蛍光は変化しなかった。そこで、両者の蛍光強度比を取ることで、正確にキナーゼ活性が評価できた。蛍光強度比を用いてキナーゼ阻害剤の阻害定数を評価することも可能であった。本プローブは、キナーゼ蛍光プローブとして、特に濃度や組織・細胞の厚みの影響を受けずにin vivoや培養細胞で正確に活性を評価できる可能性がある。以上、本課題研究期間内には計画の完遂には至らなかったものの、研究分担者との協力によって目的達成のための基盤技術の整備を完了した。
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Research Products
(15 results)
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[Journal Article] Stage-specific roles for Cxcr4 signaling in murine hematopoietic stem/progenitor cells in the process of bone marrow repopulation2014
Author(s)
Lai, C. Y., Yamazaki, S., Okabe, M., Suzuki, S., Maeyama, Y., Iimura, Y., Onodera, M., Kakuta, S., Iwakura, Y., Nojima, M., Otsu, M., & Nakauchi, H.
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Journal Title
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Generation of engraftable hematopoietic stem cells from induced pluripotent stem cells by way of teratoma formation2013
Author(s)
Suzuki, N., Yamazaki, S., Yamaguchi, T., Okabe, M., Masaki, H., Takaki, S., Otsu, M., & Nakauchi, H.
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Journal Title
Mol Ther
Volume: 21(7)
Pages: 1424-1431
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Stabilization of Cancer-specific Gene Carrier via Hydrophobic Interaction for a Clear-cut Response to Cancer Signaling2013
Author(s)
C. W. Kim, R. Toita, J.-H. Kang, K. Li, E. K. Lee, G. X. Zhao, D. Funamoto, T. Nobori, Y. Nakamura, T. Mori, T. Niidome, Y. Katayama
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Journal Title
J. Controlled Release
Volume: 170
Pages: 469-76
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Profiling of microRNA in human and mouse ES and iPS cells reveals overlapping but distinct microRNA expression patterns.2013
Author(s)
Razak SR, Ueno K, Takayama N, Nariai N, Nagasaki M, Saito R, Koso H, Lai CY, Murakami M, Tsuji K, Michiue T, Nakauchi H, Otsu M, Watanabe S.
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Journal Title
PLoS One
Volume: 8
Pages: e73532
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Congenital amegakaryocytic thrombocytopenia iPS cells exhibit defective MPL-mediated signaling.2013
Author(s)
Hirata S, Takayama N, Jono-Ohnishi R, Endo H, Nakamura S, Dohda T, Nishi M, Hamazaki Y, Ishii E, Kaneko S, Otsu M, Nakauchi H, Kunishima S, Eto K.
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Journal Title
The Journal of clinical investigation
Volume: 123
Pages: 3802-14
DOI
Peer Reviewed
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