2013 Fiscal Year Research-status Report
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24659165
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| Research Institution | Sapporo Medical University |
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Principal Investigator |
佐藤 昇志 札幌医科大学, 医学部, 教授 (50158937)
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| Keywords | HSP90 / 慢性炎症 / ERO1-α / HSP90レセプター / エンドサイトーシス / 初期エンドソーム |
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| Research Abstract |
1. 細胞外Hsp90 (exHsp90) レセプターのクローニング
平成２５年度は、マウス未熟樹状細胞細胞からcDNAライブラリーを調整し、レトロウイルスベクターpLIBにクローニングした。約１０万クローンのライブラリーをPLAT-E細胞に導入し、その４８時間後の培養上清を回収し、マウス形質細胞腫であるP3U1に感染させた。これをHsp90をコーティングしたプレートに添加し、パニング法を用いて、付着細胞由来のコロニーを１０個以上得た。この細胞から、cDNAライブラリー由来の遺伝子をPCRを用いて増幅し、シークエンスを行った。その結果、Endoplasmic reticulum oxidoreduction 1-α (ERO1-α)を同定した。このERO1-αは小胞体局在蛋白質であることが知られているが、小胞体局在シグナルを持たない分子であり、細胞膜あるいは分泌されうる可能性が考えられた。そこで、受容体として機能するか、まず細胞表面上の発現の有無を確認した。ERO1-αの組換え蛋白質を作製し、マウスに免疫し、単クローン抗体を作製した。この抗体を用いて、樹状細胞表面での発現を検討すると、確かに細胞表面での発現を認めた。ERO1-αは、マウスとヒトのアミノ酸レベルで、79.8 ％の高い相同性を持つため、本抗体を用いて、ヒト樹状細胞においても受容体として機能しているか、検討する予定である。
2. exHsp90のレセプター媒介性エンドサイトーシス
Alexa488で、蛍光色素標識したHsp90をマウス樹状細胞に添加して、その細胞内局在を時空間的に解析した。その結果、exHsp90は、初期エンドソームに貯留後、時間経過とともにエンドソームを脱出し、プロテアソームと共局在することが示された。抗Hsp90抗体を用いた結果から、exHsp90のエンドソーム脱出には、内在性のHsp90が重要な役割を果たしていることが示された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
上で記したごとく、本研究によりHsp90の樹状細胞受容体候補Endoplasmic reticulum oxidoreduction 1-α (ERO1-α)を同定することが出来た。現在、単クローン抗体を作製してさらに詳細に検討を行っている。これらの研究成果によりHsp90の慢性炎症機構における役割がより明瞭に見えてくるものと期待しているところである。以上のように、本研究における現在までの達成度はおおむね計画通りであると考える。
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| Strategy for Future Research Activity |
今後、この抗体を用いて、マウスおよびヒトのHsp90の樹状細胞への結合および取り込み抑制およびERO1-αを介する樹状細胞内取り込み後の細胞内局在を検討する。これらを通し、Hsp90の炎症機構における役割の詳細、また炎症性病態、病変での役割、あるいはこの機構を利用した炎症性疾患への治療創薬への研究進展などへの方向性が見えてくると思われる。
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[Journal Article] ERAAP and tapasin independently edit the amino and carboxyl termini of MHC class I peptides.2013
Author(s)
Kanaseki T, Lind KC, Escobar H, Nagarajan N, Reyes-Vargas E, Rudd B, Rockwood AL, Van Kaer L, Sato N, Delgado JC, Shastri N.
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Journal Title
J Immunol.
Volume: Aug 15;191(4)
Pages: 1547-55
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] High Expression of CD109 Antigen Regulates the Phenotype of Cancer Stem-Like Cells/Cancer-Initiating Cells in the Novel Epithelioid Sarcoma Cell Line ESX and Is Related to Poor Prognosis of Soft Tissue Sarcoma.2013
Author(s)
Emori M, Tsukahara T, Murase M, Kano M, Murata K, Takahashi A, Kubo T, Asanuma H, Yasuda K, Kochin V, Kaya M, Nagoya S, Nishio J, Iwasaki H, Sonoda T, Hasegawa T, Torigoe T, Wada T, Yamashita T, Sato N.
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Journal Title
PLoS One.
Volume: Dec 20;8(12)
Pages: e84187
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Potential Survival Benefit of Anti-Apoptosis Protein: Survivin-Derived Peptide Vaccine with and without Interferon Alpha Therapy for Patients with Advanced or Recurrent Urothelial Cancer-Results from Phase I Clinical Trials.2013
Author(s)
Tanaka T, Kitamura H, Inoue R, Nishida S, Takahashi-Takaya A, Kawami S, Torigoe T, Hirohashi Y, Tsukamoto T, Sato N, Masumori N.
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Journal Title
Clin Dev Immunol.
Volume: Epub 2013 Nov 20
Pages: 2013:262967
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Ectopically expressed variant form of sperm mitochondria-associated cysteine-rich protein augments tumorigenicity of the stem cell population of lung adenocarcinoma cells.2013
Author(s)
Takahashi A, Hirohashi Y, Torigoe T, Tamura Y, Tsukahara T, Kanaseki T, Kochin V, Saijo H, Kubo T, Nakatsugawa M, Asanuma H, Hasegawa T, Kondo T, Sato N.
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Journal Title
PLoS One
Volume: 2013 Nov 11;8(11)
Pages: e69095
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Ovarian cancer stem cells are enriched in side population and aldehyde dehydrogenase bright overlapping population.2013
Author(s)
Yasuda K, Torigoe T, Morita R, Kuroda T, Takahashi A, Matsuzaki J, Kochin V, Asanuma H, Hasegawa T, Saito T, Hirohashi Y, Sato N.
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Journal Title
PLoS One
Volume: 2013;8(8)
Pages: e68187
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Small proline-rich protein-1B is overexpressed in human oral squamous cell cancer stem-like cells and is related to their growth through activation of MAP kinase signal.2013
Author(s)
Michifuri Y, Hirohashi Y, Torigoe T, Miyazaki A, Fujino J, Tamura Y, Tsukahara T, Kanaseki T, Kobayashi J, Sasaki T, Takahashi A, Nakamori K, Yamaguchi A, Hiratsuka H, Sato N.
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Journal Title
Biochem Biophys Res Commun.
Volume: 439(1)
Pages: 96-102
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] ALDH1-High Ovarian Cancer Stem-Like Cells Can Be Isolated from Serous and Clear Cell Adenocarcinoma Cells, and ALDH1 High Expression Is Associated with Poor Prognosis.2013
Author(s)
Kuroda T, Hirohashi Y, Torigoe T, Yasuda K, Takahashi A, Asanuma H, Morita R, Mariya T, Asano T, Mizuuchi M, Saito T, Sato N.
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Journal Title
PLoS One.
Volume: 2013 Jun 6;8(6)
Pages: e65158
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Human Endoplasmic Reticulum Oxidoreductin 1-α (hERO1-α) is a Novel Predictor for Poor Prognosis of Breast Cancer.2013
Author(s)
Kutomi G, Tamura Y, Tanaka T, Kajiwara T, Kukita K, Ohmura T, Shima H, Takamaru T, Satomi F, Suzuki Y, Torigoe T, Sato N, Hirata K.
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Journal Title
Cancer Sci.
Volume: 104(8)
Pages: 1091-6
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Preferential expression of cancer/testis genes in cancer stem-like cells: proposal of a novel sub-category, cancer/testis/stem gene.2013
Author(s)
Yamada R, Takahashi A, Torigoe T, Morita R, Tamura Y, Tsukahara T, Kanaseki T, Kubo T, Watarai K, Kondo T, Hirohashi Y, Sato N.
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Journal Title
Tissue Antigens.
Volume: 81(6)
Pages: 428-34
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Prostate cancer stem-like cells/cancer-initiating cells have an autocrine system of hepatocyte growth factor.2013
Author(s)
Nishida S, Hirohashi Y, Torigoe T, Inoue R, Kitamura H, Tanaka T, Takahashi A, Asanuma H, Masumori N, Tsukamoto T, Sato N.
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Journal Title
Cancer Sci.
Volume: 104(4)
Pages: 431-6
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Immunotherapeutic benefit of α-interferon (IFNα) in survivin2B-derived peptide vaccination for advanced pancreatic cancer patients.2013
Author(s)
Kameshima H, Tsuruma T, Kutomi G, Shima H, Iwayama Y, Kimura Y, Imamura M, Torigoe T, Takahashi A, Hirohashi Y, Tamura Y, Tsukahara T, Kanaseki T, Sato N, Hirata K.
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Journal Title
Cancer Sci.
Volume: 104(1)
Pages: 124-9
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Nuclear, but not cytoplasmic, localization of survivin as a negative prognostic factor for survival in upper urinary tract urothelial carcinoma.2013
Author(s)
Kitamura H, Torigoe T, Hirohashi Y, Asanuma H, Inoue R, Nishida S, Tanaka T, Masumori N, Sato N, Tsukamoto T.
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Journal Title
Virchows Arch.
Volume: 462(1)
Pages: 101-7
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Prognostic impact of the expression of ALDH1 and SOX2 in urothelial cancer of the upper urinary tract.2013
Author(s)
Kitamura H, Torigoe T, Hirohashi Y, Asanuma H, Inoue R, Nishida S, Tanaka T, Fukuta F, Masumori N, Sato N, Tsukamoto T.
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Journal Title
Mod Pathol.
Volume: 26(1)
Pages: 117-24
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Expression and function of FERMT genes in colon carcinoma cells.2013
Author(s)
Kiriyama K, Hirohashi Y, Torigoe T, Kubo T, Tamura Y, Kanaseki T, Takahashi A, Nakazawa E, Saka E, Ragnarsson C, Nakatsugawa M, Inoda S, Asanuma H, Takasu H, Hasegawa T, Yasoshima T, Hirata K, Sato N.
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Journal Title
Anticancer Res.
Volume: 33(1)
Pages: 167-73
Peer Reviewed
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[Journal Article] DNA methyltransferase 1 is essential for initiation of the colon cancers.2013
Author(s)
Morita R, Hirohashi Y, Suzuki H, Takahashi A, Tamura Y, Kanaseki T, Asanuma H, Inoda S, Kondo T, Hashino S, Hasegawa T, Tokino T, Toyota M, Asaka M, Torigoe T, Sato N.
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Journal Title
Exp Mol Pathol.
Volume: 94(2)
Pages: 322-9
DOI
Peer Reviewed
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[Presentation] 癌免疫
Author(s)
佐藤昇志
Organizer
第45回日本小児感染症学会総会・学術集会特別講演
Place of Presentation
札幌
Invited
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