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2013 Fiscal Year Annual Research Report

MHCクラスI及びIIによる抗原提示経路の分子操作

Research Project

Project/Area Number 24659211
Research InstitutionKitasato University

Principal Investigator

森川 裕子  北里大学, 大学院感染制御科学府, 教授 (20191017)

Keywords分子修飾 / 抗原提示
Research Abstract

細胞内で合成された内在性抗原はユビキチン(Ub)化されプロテアソームで分解された後、粗面小胞体内でMHCクラスI分子と結合し、細胞表面に輸送され細胞傷害性T細胞を誘導する。細胞内発現のウイルス抗原をMHCクラスI経路に効率良く誘導できるよう分子修飾(分子設計)を試みた。
◆ユビキチン化
プロテアソーム分解はUb依存的であることから、HIV Gag蛋白のN末端にUbを付加した。単球系培養細胞ではtransfection効率が悪かったため、上皮系細胞(HeLa細胞)で発現させた。サイクロヘキシミドを添加して新規蛋白質合成を止めるとともに、プロテアソーム阻害剤(MG132+cLL)あるいはリソソーム阻害剤(クロロキン)を添加して蛋白質分解を止めた。経時的に細胞を回収してGag抗原量を調べたところ、Ub-Gag蛋白はGag蛋白より効率よく分解されることが判明した。この分解はプロテアソーム阻害剤で阻止されたが、クロロキンでは止まらなかったことから、Ub付加によりGag蛋白はより効率よくプロテアソーム経路で分解されるようになると考えられた。インフルエンザHA蛋白の場合は、予め膜貫通配列を削除したHA1サブユニットのN末端にユビキチンを付加した。現在、同様の解析を行っている。
◆N-end rule
蛋白質N末端のアミノ酸V, M, Gはその蛋白質を安定化し、Q, R, E, F, D, K は不安定化することが知られている。Gag蛋白のN末端アミノ酸MをRに置換し、Ubを付加した。HeLa細胞で発現させ、同様に、プロテアソーム阻害剤あるいはリソソーム阻害剤を添加して経時的にGag分解を調べた。R-Gag蛋白はM-Gag蛋白より効率よく分解され、この分解はプロテアソーム阻害剤で止められたが、クロロキンでは止まらなかった。従って、N末端アミノ酸MをRに置換することにより、Gag蛋白はより効率よくプロテアソーム経路で分解されると考えられた。

  • Research Products

    (6 results)

All 2013

All Journal Article (3 results) (of which Peer Reviewed: 3 results) Presentation (3 results)

  • [Journal Article] Trans-packaging of human immunodeficiency virus type 1 genome into Gag virus-like particles in Saccharomyces cerevisiae2013

    • Author(s)
      Tomo N, Goto T, Morikawa Y.
    • Journal Title

      Microb Cell Fact

      Volume: 12 Pages: 28

    • DOI

      10.1186/1475-2859-12-28

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Novel role of HSP40/DNAJ in the regulation of HIV-1 replication2013

    • Author(s)
      Urano E, Morikawa Y, Komano, J.
    • Journal Title

      J AIDS

      Volume: 64 Pages: 154-162

    • DOI

      10.1097/QAI.0b013e31829a2ef8

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Sensitive detection of measles virus infection in the blood and tissues of humanized mouse by one-step quantitative RT-PCR2013

    • Author(s)
      Ikeno S, Suzuki M, Mahmod M, Ishige M, Kobayashi M, Ohno S, Takeda M, Nakayama T, Morikawa Y, Terahara K, Okada S, Takeyama H, Tsunetsugu-Yokota Y.
    • Journal Title

      Front Microbiol

      Volume: 4 Pages: 1-8

    • DOI

      10.3389/fmicb.2013.00298

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] HIV-1複製におけるRab7の機能解析2013

    • Author(s)
      林浩司、竹村太地郎、藤野真之、百瀬文隆、森川裕子、村上努
    • Organizer
      第61回日本ウイルス学会学術集会
    • Place of Presentation
      神戸市
    • Year and Date
      20131110-20131112
  • [Presentation] ヒト化マウスの麻疹ウイルスベクター評価系への応用2013

    • Author(s)
      池野翔太、鈴木基臣、寺原和孝、石毛真行、駒瀬勝啓、竹田誠、森川裕子、中山哲夫、柳雄介、竹山春子、横田恭子
    • Organizer
      第61回日本ウイルス学会学術集会
    • Place of Presentation
      神戸市
    • Year and Date
      20131110-20131112
  • [Presentation] 感染細胞内インフルエンザウイルスvRNPの非変性検出を可能とする手法改良の試み2013

    • Author(s)
      百瀬文隆、森川裕子
    • Organizer
      第61回日本ウイルス学会学術集会
    • Place of Presentation
      神戸市
    • Year and Date
      20131110-20131112

URL: 

Published: 2015-05-28  

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