2014 Fiscal Year Annual Research Report
アレルギー病態理解と新規治療法開発に向けたリンパ球刺激試験法の改良
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24659488
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| Research Institution | Gunma University |
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Principal Investigator |
荒川 浩一 群馬大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (50272232)
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| Project Period (FY) |
2012-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | アレルギー / T細胞受容体 / ALST |
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| Outline of Annual Research Achievements |
目的：IgEに依存しないアレルギー反応の補助診断法として、リンパ球刺激試験（LST)が有用であることが知られているが、抗原刺激後5日から8日の培養期間を必要とする。また活性化したリンパ球の分泌するサイトカインなどの効果により抗原特異的に反応するリンパ球以外の増殖を検出している可能性も大きいなどの欠点がある。本研究では、LST法のこれらの欠点を改善し、抗原特異的T細胞の存在を検出する簡便かつ短期間でできる新規検査法の開発を目的とした。
方法および結果： 末梢血リンパ球を抗原添加した無血清培地AIM-Vを用いて24時間培養した後、活性化T細胞の増加を細胞表面に発現するマーカーに対する蛍光標識抗体を用いてフローサイトメトリーにより分析した。T細胞の活性化に伴って発現するマーカー陽性を示すT細胞は、培養後24時間後無刺激区に比較して増加がみられた。
CDR3領域の増幅：ヒトＴ細胞受容体の可変領域CDR3を増幅するPCRプライマー25種類（Constant:1 Variable:1-24)とNested Primer25種類（ConstantNS:1 , VariableNS:1-24）を作製した。これらのプライマーを用いてヒト末梢血リンパ球におけるＴ細胞受容体可変領域長の分布を電気泳動により確認した。その結果、２４時間の刺激培養では特定のバリアブルリージョンのフラグメント（長さ）が、増幅しているとは言えなかった。さらに、次世代シークエンス法を用いて、T細胞のCDR領域についてシークエンス解析を行い、現在解析中である。
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