2012 Fiscal Year Research-status Report
C型肝炎ウイルス侵入可能マウスの作製とその応用ー感染癌のモデル動物作製に向けて
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24659585
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Research Institution | Hamamatsu University School of Medicine |
Principal Investigator |
上里 忠良 浜松医科大学, 医学部, 准教授 (40115465)
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Project Period (FY) |
2012-04-01 – 2014-03-31
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Keywords | C型肝炎ウイルス / 侵入 / CD81 / CLDN1 / OCLN / SRBI |
Research Abstract |
まず、マウスCd81蛋白質、Ocln蛋白質がHCVの肝細胞へのエントリーを阻害するかどうかを検討するために、マウスCd81発現ベクター、マウスOcln発現ベクターとヒトNPC1L1 ノックダウンベクターをHuh7.5.1細胞に遺伝子導入し、永久細胞株を樹立した。これらの細胞にHCVppを感染させてエントリーを測定した結果、マウスCd81蛋白質は30%の阻害、マウスOcln蛋白質は20%の阻害、NPC1L1蛋白質のノックダウンでは50%のウイルスのエントリー阻害が観察された。この結果は、マウスCd81蛋白質とマウスOcln蛋白質がヒトCD81蛋白質やヒトOCLN蛋白質に競合阻害的に働いていることを示唆している。また、NPC1L1蛋白質をノックダウンさせるとウイルスのエントリーが激減することから、ウイルスのエントリーに促進的に働いていることが示された。今、細胞レベルの結果から、Alb-CD81?Alb-CD81;Alb-OCLN/Alb-OCLN;Alb-SRBI/Alb-SRBI;Alb-CLDN1/Alb-CLDN1;Cd81-/-;Ocln-/-マウスを作製し、細胞レベルでの実験結果が個体レベルでもおこるかどうかを検証する準備をしている。 またヒトCD81 cDNAとヒトOCLN cDNAをアルブミン遺伝子座位にノックインし、ヒトCLDN1 cDNAとヒトSRBI cDNAを他のアルブミン遺伝子座位にノックインさせるためのtargeting vectorを作成した。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
マウスCd81蛋白質やマウスOcln蛋白質がウイルスのエントリーを阻害したことは、前回報告した我々の論文(Biomed Res 2011) に一致したデータである。また、ヒトNPC1L1蛋白質がウイルスのエントリーに促進的に働くことも追試できた。
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Strategy for Future Research Activity |
ヒトHuh7.5.1細胞にマウスCd81蛋白質を発現させた永久株、マウスOcln蛋白質を発現させた永久株があるので、マウスCd81に対する抗体で免疫沈降をおこない、結合物をウエスタンブロット法で検出することで,マウスCd81蛋白質がヒトのどの蛋白質を阻害しているかを明らかにする。同じことをOcln蛋白質に対する抗体を用いて行う。 ヒトCD81/ヒトOCLNノックインマウスとヒトCLDN1/ヒトSRBIノックインマウスを作成する。両者を交配し、ヒト4因子が過剰に発現したマウスを得る。このマウスに患者血清からのC型肝炎ウイルスを投与して、感染がおこるかどうかを判定する。
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Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
2回の学会参加の旅費以外は、消耗品に使用する。
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