2012 Fiscal Year Research-status Report
子宮体癌幹細胞形質獲得機構の解明と幹細胞マーカーの同定
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24659736
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| Research Institution | Kyushu University |
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Principal Investigator |
加藤 聖子 九州大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (10253527)
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| Project Period (FY) |
2012-04-01 – 2014-03-31
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| Keywords | 子宮体癌 / 癌幹細胞 |
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| Research Abstract |
子宮体癌の癌幹細胞形質獲得機構における精巣特異的発現遺伝子dbpC/contrin(以下dbpC)の関与を検討するとともに、癌幹細胞マーカーの同定を試みた。
１）子宮体癌細胞株Ishikawa(IK)細胞株にdbpC発現ベクターを形質導入
し、過剰発現株(IK-dbpC細胞)を樹立し、幹細胞マーカーALDH1の発現とside-population (SP)細胞の出現率を解析したところ、IK-dbpC細胞はmock細胞に比べて幹細胞マーカーALDH1の発現が亢進し、約10倍のSP出現率をみとめた。dbpC-siRNAにより抑制するとSP出現率とALDH1の発現は低下した。２）Microarray解析を行い、dbpC発現細胞と非発現細胞間で発現量に
差がある遺伝子群の解析を行ったところ、mock 細胞に比べIK-dbpc細胞では癌精巣抗原CT45の発現が約1000倍亢進していた。
３）ヌードマウスにIK-dbpc細胞、IK-dbpC SP細胞とmock細胞を皮下移植し造腫瘍能の検討を行ったところ、IK-dbpC細胞はmock細胞に比べて腫瘍能は低下した。
４）発現が亢進した遺伝子について同意を得た子宮体癌100例の検体を用いて組織型、進行期、予後との相関の検討を行ったところ、低分化、臨床進行期が進むほどCT45の発現頻度が高くなる傾向を認めた。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
今までの研究成果により、dbpC/contrinは癌幹細胞の形質発現に関与しており、精巣癌抗原であるCT45は癌幹細胞のマーカーになる可能性が示すことができた。
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| Strategy for Future Research Activity |
１） マイクロアレイやメチレーションアレイを用いて、CT45のほかにmock 細胞に比べてIK-dbpC細胞やIK-dbpC-SP細胞に発現が亢進している遺伝子やメチレーションの状態を網羅的に検索する。
２） mock細胞、IK-dbpC細胞、IK-dbpC-SP細胞における上記６）でスクリーニングされた遺伝子群の発現をreal-time PCR、Western blot法で確認する。
３）１）で発現亢進が確認された遺伝子については、クローニングし、発現ベクターに組み込み、IKに形質導入し、幹細胞形質、造腫瘍能等を解析し、IK-dbpC細胞やmock細胞と比べる。また、そのsiRNAを作製し、発現抑制系での変化を解析する。
４）上記解析にて、幹細胞マーカーの候補となった遺伝子はついては、他の子宮体癌細胞株のSP細胞、non-SP細胞や同意を得て採取された臨床検体を用いて、子宮体癌組織での発現を解析する。
５）アレイからパスウエイ解析を行い、幹細胞形質に関与するシグナル経路を同定する。
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| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
１）IK-dbpC細胞とmock細胞の間で発現の差がある遺伝子やメチレーションのスクリーニングの ため、アレイ解析を 初年度に予定しておりこのための経費が必要である。
（メチレーションアレイ解析：1000,000円、データ解析用PC:200,000円）
２） 細胞培養の培地、増殖因子、抗体、試薬等のための経費が必要である。
（300,000円/２年）
論文発表の際の英文校正・印刷代が必要である。（200,000円）
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