2012 Fiscal Year Annual Research Report
ＰＡＭＰｓ－ＤＡＭＰｓの包括的制御システムとしてのＴＭ－ＰＣ／ＥＰＣＲ装置
| Project/Area Number |
24659798
|
|---|
| Research Institution | Kagoshima University |
|---|
Principal Investigator |
丸山 征郎 鹿児島大学, 医歯学総合研究科, 特任教授 (20082282)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
伊藤 隆史 鹿児島大学, 医歯学総合研究科, 特任講師 (20381171)
橋口 照人 鹿児島大学, 医歯学総合研究科, 教授 (70250917)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2012-04-01 – 2013-03-31
|
| Keywords | PAMPｓ / DAMPs / トロンボモジュリン / プロテインC |
|---|
| Research Abstract |
１．In vitro 実験
１）TM発現抑制内皮細胞での実験：培養内皮細胞においてTM、PC受容体(EPCR), PAR-1(Protease Activated Receptor-1;APC)をそれぞれのsiRNAでノックダウンし、あるいはそれらの 抗体で当該分子をブロックして、1）内皮細胞のviability,形態を解析した。2）上清中のHMGB1濃度と分解の有無をイムノブロット法で解析した。3）上清中のヒストン濃度と分解の有無をイムノブ ロット法で解析した。①結果：トロンビンダウンレギュレーション内皮細胞をトロンビン、あるいはPAR-1 activating peptide で刺激すると正常細胞より強いアポトーシスが誘導された(約４０％増加)．トロンビン刺激でHMGB-1の細胞外遊離が促進されたがこれは生細胞からの遊離であった。ヒストンに関しては変化無かった。２）腹腔マクロファージ（マウス）、Raw細胞刺激実験
細胞をPAMPsの代表として:LPS, DAMPsとしてHMGB-1, あるいはATPで刺激すると、単独刺激よりco-stimulation の場合には強い相乗効果が観られ、IL-1β, IL-18の産生・放出が増強した。これはLPS刺激でNF-kB の活性化状態が準備され、次にATPあるいはHMGB1刺激で、インフラマソームの活性化が誘導されるためと考えられた。
２．In vivo実験
１）LPS,HMGB1,ATPなどの複数投与では、これらの単独投与に比較して、強い炎症が惹起された。２）遺伝子組換えTM(rTM)の投与はそれらに対し、救命的効果が明らかであった。これはrTMによるトロンビン制御のほかに、LPS やHMGB1 吸着中和、が関係しているものと考えられた。
|
