2014 Fiscal Year Annual Research Report
おとり遺伝子を用いた変形性関節症への新規遺伝子治療法の応用
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24659838
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| Research Institution | Kanazawa Medical University |
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Principal Investigator |
石橋 浩晃 金沢医科大学, 医学部, 准教授 (90254630)
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| Project Period (FY) |
2012-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | 変形性関節症 / 基質破壊酵素 / 遺伝子治療 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
細胞培養実験により各種サイトカイン刺激が与えるuPA，MMPsの発現状況の解析
関節由来細胞における炎症性サイトカインの基質破壊酵素産生機構についての以下の検討を行った．関節由来細胞を分離培養し，TNFα刺激によりuPAやMMP-1の発現量が，TNF αの濃度に依存性してuPA およびMMP-1のmRNA発現が亢進することを解析した．また，関節細胞はTNFα共存下でNF-kBの活性化がみられる事をバンドシフトアッセイにより確認した．ヒト顎関節頭組織におけるTNFα,uPA およびMMP-1の局在を病理学的に検索し軟骨細胞の周囲基質での発現を認め，生体内において密接な相互作用を示している可能性が示唆された．組織中の基質破壊活性をin situ zymographyにより解析した．関節軟骨細胞をTNFαで刺激すると，転写因子NF-kB，Sp1の活性化がみられることを，バンドシフトアッセイにより確認した．動物に作成した変形性関節症組織において導入条件を確立した．LacZ発現ベクタ－をHVJ-リポソ－ム法により癌組織に導入し，効果的遺伝子導入法を観察・確立した NF-kB，Sp1を標的とした合成オリゴを，HVJ-リポソ－ム法を用いて，関節軟骨細胞に100％導入できる条件を確立した．NF-kB，Sp1に対するおとり遺伝子を導入し，関節軟骨由来細胞のuPA，MMP-1産生を抑制できることを解明した．
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