ＲＮＡｉ医薬品の実用化に向けたｓｉＲＮＡの細胞内輸送機構の解析

2012 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 24689005
• Research Category: Grant-in-Aid for Young Scientists (A)
• Research Institution: National Institute of Health Sciences
• Principal Investigator: 井上 貴雄 国立医薬品食品衛生研究所, 遺伝子細胞医薬部, 室長 (50361605)
• Project Period (FY): 2012-04-01 – 2015-03-31
• Keywords: 核酸医薬

Research Abstract

RNAi医薬品（siRNA）に代表される核酸医薬は、抗体医薬に続く革新的次世代医薬品として大きく注目されている。しかし、現状では個体投与における効果は限定的であり、細胞内へのsiRNAの導入効率を改善することが急務の課題となっている。本研究課題では、これまで分子基盤がほとんど明らかになっていない細胞内へのsiRNAの取り込み機構に関し、無脊椎動物（線虫、ショウジョウバエ等）の研究から明らかになった知見を元に、ヒト細胞を用いて機能的な相同性を検証する。また、siRNAライブラリーを用いた網羅的スクリーニングにより、細胞内へのsiRNAの取り込みに関わる分子を探索する。これにより、病態局所においてsiRNAの取り込みを促進する分子を同定する。
24年度においては、当室にマルチイメージアナライザー（In Cell Analyzer 2000）を導入し、siRNAの細胞内への導入を評価するアッセイ系を構築した。具体的には、GFP安定発現細胞（HEK293, HeLa）にGFPに対するsiRNAを添加し、GFP蛍光の増減でsiRNAの細胞内到達を評価するアッセイ系を最適化した。また、siRNAの輸送経路を特定するため、蛍光標識したsiRNAを添加した条件で細胞内オルガネラの抗体染色を行い、どのような時間経過で細胞質に到達するかを明らかにした。一方で、「siRNAの細胞内への取り込みに必要な分子」の機能を阻害するため、１）候補分子をRNAiによって発現抑制する手法、および２）ゲノム編集技術で候補分子を遺伝子破壊する手法に関して、パイロット実験を行った（後者に関しては現在進行中）。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

24年度の研究到達目標は全てクリアしており、また、研究の進行に伴い、発案した新しいアプローチにも既に着手している。

Strategy for Future Research Activity

当初の計画通り、線虫遺伝学の知見に基づいた候補遺伝子の解析を行う。また、新たに網羅的な候補分子のスクリーニングを導入する。

Expenditure Plans for the Next FY Research Funding

25年度以降に消耗品を多く使用するsiRNAスクリーニングを行うため
研究計画に従い、siRNAスクリーニングに遂行に使用する。