2013 Fiscal Year Annual Research Report
ＡＬＳ霊長類モデルによる経シナプス逆行性伝播機序の解明
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24689039
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| Research Institution | Tokyo Medical and Dental University |
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Principal Investigator |
大久保 卓哉 東京医科歯科大学, 医歯(薬)学総合研究科, 助教 (90587461)
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| Project Period (FY) |
2012-04-01 – 2014-03-31
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| Keywords | ALS / 霊長類モデル / TDP-43 / 伝播 / リン酸化 |
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| Research Abstract |
我々が構築した霊長類ALSモデルにおいて、TDP-43の伝播機序を解明する目的で、pAAV-IRES-hrGFPベクターを用いてヒト野生型TDP-43とhrGFPを同時に過剰発現させ、脊髄および脳におけるTDP-43およびリン酸化TPD-43の拡がりを解析した。カニクイザル第6頸髄(C6)利き手側の前角細胞付近にflagで標識したヒト野生型TDP-43発現AAV1-IRES-hrGFPベクター(3x10E12vg/ml、5microliter)を注入し、完全麻痺となった4週後に解剖し、病理組織検査、PCR解析を昨年に引き続き行った。PCR解析では注入部位C6からTh1まではウイルスベクターが確認されたが、C2より高位脊髄および脳、またTh4以下の下位脊髄では検出されなかった。また、抗リン酸化抗体による病理組織解析では、神経細胞核に強染、非連続に分布しており、外因性のFlag-TDP-43はリン酸化を受けていた。
続いて、ALS患者脳から蛋白不溶性画分を抽出してサル脊髄に直接注入し、蛋白伝播モデルを構築することを試みた。ALS患者剖検脳前頭葉皮質約0.5gからサルコシル不溶性蛋白画分を抽出し、タグ無し全長TDP-43を発現させたSH-SY5Y細胞に、このサルコシル不溶性画分をトランスフェクションし、細胞から抽出した蛋白画分をイムノブロットすることでシード効果を確認した。続いてカニクイザル2頭に対して麻酔下に椎弓切除術を行い、ALS患者脳および非ALS患者脳から抽出したサルコシル不溶性蛋白画分を第6頚髄の利き手側の前角細胞付近に注入した。麻痺症状は出現せず、注入32週後に解剖し、病理組織学的検査を行ったが、TDP-43の細胞質異常局在やリン酸化の所見は認められなかった。
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| Current Status of Research Progress |
Reason
25年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
25年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
25年度が最終年度であるため、記入しない。
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Research Products
(2 results)
