2013 Fiscal Year Annual Research Report
| Project/Area Number |
24701013
|
|---|
| Research Institution | Kinki University |
|---|
Principal Investigator |
坂井 和子 近畿大学, 医学部, 助教 (20580559)
|
|---|
| Keywords | ＥＭＬ４－ＡＬＫ / 血清 |
|---|
| Research Abstract |
肺がんにおいてＡＬＫ阻害剤が著効するＥＭＬ４－ＡＬＫ融合遺伝子の非侵襲的検出法の確立を目的として、血清検体におけるＥＭＬ４－ＡＬＫ検出を検討した。平成２４年度には、ＥＭＬ４－ＡＬＫ融合遺伝子は複数のバリアントが存在することから、マルチプレックスによる検出系の検討を行った。また、血清検体でのＥＭＬ４－ＡＬＫ融合遺伝子の測定条件の最適化を目指し、測定条件の検討を行った。その結果、ＥＭＬ４－ＡＬＫ陽性患者２名の血清から、ＥＭＬ４－ＡＬＫのバリアント１およびバリアント３ａの検出に成功した。一方で、ＥＭＬ４－ＡＬＫ陽性患者の血清から検出可能であったＥＭＬ４－ＡＬＫ融合遺伝子の検出成功率は、１２例中２例と低いものであったことから、平成２５年度には、血清からのＲＮＡ抽出手法の改善を試みた。これまでに用いてきた、カラム法によるＲＮＡ抽出法に加えて、磁性ビーズを用いた抽出およびフェノール・クロロホルムによる抽出を行い、カラム法との比較を行った。ＲＮＡ収量はフェノール・クロロホルムによる抽出法においてもっとも高収量が認められたが、ＥＭＬ４－ＡＬＫ融合遺伝子の検出成功率に改善は認められなかった。この一因として、血清中に遊離しているＲＮＡが微量でかつ不安定であることが考えられ、ＲＮＡよりも安定なＤＮＡを用いた検討を行った。まず、ＤＮＡ上でのＡＬＫの融合部位を検討した結果、ＥＭＬ４遺伝子との融合はＡＬＫのイントロン１９の約２，０００ｂｐの間でランダムに起こっていることが明らかとなった。約２，０００ｂｐのイントロン１９の領域をすべて増幅できるプライマーのデザインを行い、最適化の検討を行うことで、ＤＮＡを鋳型としたＥＭＬ４－ＡＬＫ融合遺伝子の検出が可能と考えられる。本研究を通じて、血清中のＲＮＡを鋳型として、低効率ではあるもののＥＭＬ４－ＡＬＫ融合遺伝子の検出が可能であった。
|
-
[Journal Article] Detection of EGFR T790M mutation in plasma DNA from patients refractory to EGFR tyrosine kinase inhibitor.2013
Author(s)
Sakai, K., Horiike, A., Darryl, I., Keita, K., Fujita, Y., Tanimoto, A., Sakatani, T., Saito, R., Kaburaki, K., Noriko, Y., Ohyanagi, F., Nishio, M., Nishio, K.
-
Journal Title
Cancer Science
Volume: 104
Pages: 1198-1204
DOI
Peer Reviewed
-
[Presentation] Detection of EGFR T790M mutation in plasma DNA from patients refractory to EGFR tyrosine kinase inhibitor.2013
Author(s)
Sakai, K., Horiike, A., Darryl, I., Keita, K., Fujita, Y., Tanimoto, A., Sakatani, T., Saito, R., Kaburaki, K., Noriko, Y., Ohyanagi, F., Nishio, M., Nishio, K.
Organizer
The 11th Annual Meeting of Japanese Society of Medical Oncology
Place of Presentation
仙台国際センター
Year and Date
20130829-20130831
