2014 Fiscal Year Annual Research Report
代謝制御ネットワークにおける転写因子ＣＲＰのアセチル化の役割の解析
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24710214
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| Research Institution | Tokyo Institute of Technology |
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Principal Investigator |
島田 友裕 東京工業大学, 資源化学研究所, 助教 (10535230)
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| Project Period (FY) |
2012-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | CRP / アセチル化 / ゲノム転写制御 / 代謝制御 / Genomic SELEX |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究は大腸菌における炭素源代謝のグローバルレギュレーターであるCRPのアセチル化による支配下プロモーター群の使い分け機構の解析、およびゲノム包括転写制御機構の解析を行い、CRPの新規転写制御機構による代謝制御の全体像の理解を目指して実施したものである。
これまでに代謝に応じたCRPのアセチル化レベルの変動を観察していたため、この結果に基づいて、研究の最終年度はCRP支配下遺伝子群への影響をアセチル化レベルの変動に合わせてノーザンブロッティング解析で検証した。しかしながら、CRP依存型プロモーターのうち、CRPのアセチル化部位に関与しないと推測されたClass Iプロモーターおよび関与すると推測されたClass IIプロモーターでその活性への影響に明確な差は観察されなかった。細胞内ではCRP以外にも様々な因子が転写活性化に関与していることが一因と考えられ、in vivoの実験では実際にゲノム上のCRPのアセチル化部位を一残基置換した影響を観察する必要があることが示唆された。また、精製CRPタンパク質を用いたin vitroの転写実験を行うことで、影響が明確になると考えられる。
その一方で、転写装置本体であるRNAポリメラーゼのゲノム上の分布およびmRNAの転写開始点およびその活性レベルを同定することに成功し、ゲノム全体におけるプロモーターを推測し、その結果を論文で報告した。この結果を基盤として、ゲノム上のCRPのアセチル化状態を人工的に模倣したCRP変異株を作製し、同様の実験を行いその差を観察することが、上記の問題を解決する一案と考えられた。
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[Journal Article] Unprecedented high-resolution view of bacterial operon architecture revealed by RNA sequencing.2014
Author(s)
Conway T, Creecy JP, Maddox SM, Grissom JE, Conkle TL, Shadid TM, Teramoto J, San Miguel P, Shimada T, Ishihama A, Mori H, Wanner BL.
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Journal Title
MBio
Volume: 5
Pages: E01442～14
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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