2014 Fiscal Year Annual Research Report
新規Ｇタンパク質共役受容体リガンド探索システムの開発とその応用
| Project/Area Number |
24710247
|
|---|
| Research Institution | The University of Tokyo |
|---|
Principal Investigator |
飯塚 怜 東京大学, 薬学研究科(研究院), 助教 (90541954)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2012-04-01 – 2015-03-31
|
| Keywords | Gタンパク質共役受容体 / エマルジョン / 出芽酵母 / 分子進化 / マイクロ流体デバイス |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
本研究では，GPCRを作動するペプチドリンガンドを効率よく創出するシステムを構築し，それを実践することを目指した．これまでに，「マイクロ流体デバイスを用いたWater-in-oil（W/O）エマルジョンの作製」，「エマルジョン内でのリガンド合成・リガンドアッセイ」，「蛍光性の酵母を内包するエマルジョンの分離・回収」，「エマルジョン内のDNAの回収」といった，ペプチドリガンド創出システムの要素技術の確立に努めてきた．26年度は，以下の二項目について研究を実施した．
(1) エマルジョン内でのヒトGPCRに対するリガンド合成・リガンドアッセイ
26年度初頭から，エマルジョン内でのGPCRに対するリガンド合成・リガンドアッセイが安定的に行えないという問題に直面した．様々な検討を重ねた結果，使用していた再構成型タンパク質合成系にその原因があることを見出した．これまでと異なるメーカーの再構成型タンパク質合成系を用いることで，エマルジョン内でのGPCRに対するリガンド合成・リガンドアッセイが再現性よく行えるようになった．
(2) 蛍光性の酵母を内包するエマルジョンの分離・回収法の開発
蛍光性の酵母を内包するW/Oエマルジョンの分離・回収を自動化すべく，オンチップ・バイオテクノロジーズ社のOn-chip Sortの使用を検討した．その結果，95%程度の効率・純度で蛍光性の酵母を内包するW/Oエマルジョンを分離・回収することに成功した．今後はこの分離・回収法と，24年度に確立したマイクロマニピュレーターを用いた回収法を併用していきたい．
本研究を通じて，GPCRを作動させるペプチドリンガンドを効率的に創出するための要素技術の確立に成功した．これらの技術を集積することで，疾患に関連するGPCRを作動させるペプチドリガンドの取得が可能になると考えている．
|
-
-
-
-
[Presentation] Peptide-based ligand screening system for G protein-coupled receptors using water-in-oil droplets.2015
Author(s)
Takashi Sakurai, Ryo Iizuka, Rui Sekine, Yasuyuki Nakamura, Dong Hyun Yoon, Tetsushi Sekiguchi, Jun Ishii, Akihiko Kondo, Shuichi Shoji, and Takashi Funatsu
Organizer
International Workshop on Extended-nano Fluidics
Place of Presentation
Koshiba Hall, The University of Tokyo (Tokyo)
Year and Date
2015-03-26 – 2015-03-27
-
-
-
[Presentation] PEPTIDE-BASED LIGAND SCREENING SYSTEM FOR G PROTEIN-COUPLED RECEPTORS USING WATER-IN-OIL MICRODROPLETS.2014
Author(s)
T. Sakurai, R. Iizuka, R. Sekine, Y. Nakamura, D. H. Yoon, T. Sekiguchi, J. Ishii, A. Kondo, S. Shoji, and T. Funatsu
Organizer
The 18th International Conference on Miniaturized Systems for Chemistry and Life Sciences (MicroTAS 2014)
Place of Presentation
Henry B. Gonzalez Convention Center (San Antonio, TX, USA)
Year and Date
2014-10-26 – 2014-10-30
-
-
-
-
