2013 Fiscal Year Annual Research Report
高精度・多検体同時解析可能な巨大ＤＮＡコーミング法の開発
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24760648
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| Research Institution | Toyohashi University of Technology |
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Principal Investigator |
栗田 弘史 豊橋技術科学大学, 工学(系)研究科(研究院), 助教 (70512177)
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| Keywords | DNA伸張固定 / 分子コーミング |
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| Research Abstract |
本研究では分子生物学・ナノエレクトロニクスなど広範囲に応用可能なゲノムサイズDNA伸張固定・多検体同時解析・集積化を可能にする新規分子コーミング技術の開発を目的としている。前年度の研究では、微細流路内部に単一の油-液界面を形成し、ポンプを用いてその界面移動を制御してDNAを伸張固定できることを示した。今年度はこの方法についてDNA伸張固定の基礎的検討を行った。界面移動速度、DNA溶液特性(DNA濃度、pH、塩濃度)、油-液界面特性(界面活性剤、界面へのDNAの吸着)、オイル特性(粘度、比重)およびガラス表面特性(親水・疎水)をパラメータとして分子コーミングを行い、蛍光顕微鏡観察によりDNA観察を行った。その結果、既往のコーミング法と同様にDNAの伸張固定化には添加するNaCl濃度が伸張度と固定化密度に大きく影響することが示された。また断面のアスペクト比が異なる微細流路を用いると流路上面から見た界面形状が変化する。DNAは界面に対して垂直に伸張固定されるため、界面を湾曲させずに流れ方向にDNAを伸張固定するには断面のアスペクト比が小さい流路が適していた。また安定した流れ・界面の形成に水溶液とオイルの比重の関係が重要であった。この方法の応用例として、長鎖DNAを酸化ストレスに晒し、それによるDNAの切断を定量的に解析した。さらに反応時に抗酸化剤を添加した場合にはDNA切断が抑制され、抗酸化効果も定量化できた。
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