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2012 Fiscal Year Research-status Report

ストレス応答の性差を作るエピジェノミクス-視床下部CRFニューロンに着目して-

Research Project

Project/Area Number 24790241
Research InstitutionNippon Medical School

Principal Investigator

肥後 心平  日本医科大学, 医学部, 助教 (50623922)

Project Period (FY) 2012-04-01 – 2014-03-31
KeywordsCRF / stress / epigenomics / sex difference
Research Abstract

24年度に関しては研究遂行に必要な実験手技の条件検討を中心におこなった。本研究の実験手技の主なものは、DNAメチル化解析、ChIPアッセイ、および発現解析と免疫染色/in situ hybridizationによるCRFの定量・定性解析である。このうち、DNAメチル化解析とChIPアッセイに関してはその条件検討が終了し、その成果の一部を第118回日本解剖学会総会において発表した(2P-G016、2P-G027)。また、CRFの定量・定性解析のうち、免疫染色についても、その成果の一部を論文発表(Takumi et al, Neurosci Lett, 2012), および解剖学会総会にて発表した。発現解析は、実験計画において、CRFニューロン1細胞あたりのCRF発現量を見積もるためにc-Fos RFP ratにストレス負荷し、室傍核よりRFP陽性細胞をピックアップしシングルセルPCRを行う予定であったが、c-Fos RFP ratにおける赤色蛍光が弱く、判別が難しいと判明したため、in situ hybridizationにおける解析に切り替えて実験を構築しなおした。in situ hybridizationによる定量解析についても条件検討は終了している。
実験条件が概ね定まったため、現在、ステロイドホルモンの投与などを行わない自然状態の雌雄ラット(雌ラットは性周期によるステロイドホルモンの変動を考慮し発情間期、発情期の2期をとっている)を用いた解析を行なっている。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

現在までに実験手法の条件検討を終了、その一部を論文にて発表しており、25年度における実験試料の追加と解析を行うことで当初予定していた実験計画に沿った研究遂行が可能であると考える。

Strategy for Future Research Activity

現在進めている①ステロイドホルモンの投与を行わない自然状態のラットに加え、②精巣除去、卵巣除去した後にステロイドホルモンの投与を行ったモデルラット、③出生時に精巣除去したオスラット(メス様の脳モデル)、出生時に過剰エストロゲンを投与したメスラット(オス様の脳モデル)を作成し、室傍核および扁桃体におけるCFRプロモータ解析を行う予定である。

Expenditure Plans for the Next FY Research Funding

研究費は24年度と同様、主に動物を購入する費用、試薬等を購入するための消耗品費にあてる。また一部を学会発表などの旅費などにあてる予定である。メチル化解析において、DNAシーケンス解析のみを実験効率化のために外部委託する予定であり、その費用にも使用予定である。

  • Research Products

    (7 results)

All 2013 2012

All Journal Article (4 results) (of which Peer Reviewed: 4 results) Presentation (3 results)

  • [Journal Article] Direct and Specific Effect of Sevoflurane Anesthesia on rat Per2 Expression in the Suprachiasmatic Nucleus.2013

    • Author(s)
      Anzai M, Iijima N, Higo S, Takumi K, Matsuo I, Mori K, Ohe Y, Kadota K, Akimoto T, Sakamoto A, Ozawa H.
    • Journal Title

      PLoS ONE

      Volume: 8(3) Pages: e59454

    • DOI

      10.1371/journal.pone.0059454

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Time-dependent repression of mPer2 expression in the suprachiasmatic nucleus by inhalation anesthesia with sevoflurane.2012

    • Author(s)
      Kadota K, Iijima N, Ohe-Hayashi Y, Takumi K, Higo S, Sakamoto A, Ozawa H.
    • Journal Title

      Neuroscience Letters

      Volume: 528(2) Pages: 153-158

    • DOI

      10.1016/j.neulet.2012.07.061.

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Immunohistochemical analysis of the colocalization of corticotropin-releasing hormone receptor and glucocorticoid receptor in kisspeptin neurons in the hypothalamus of female rats.2012

    • Author(s)
      Takumi K, Iijima N, Higo S, Ozawa H.
    • Journal Title

      Neuroscience Letters

      Volume: 531(1) Pages: 40-45

    • DOI

      10.1016/j.neulet.2012.10.010.

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] The effects of gonadal steroid manipulation on the expression of Kiss1 mRNA in rat arcuate nucleus during postnatal development.2012

    • Author(s)
      Takumi K, Iijima N, Iwata K, Higo S, Ozawa H.
    • Journal Title

      The Journal of Physiological Sciences

      Volume: 62(6) Pages: 453-460

    • DOI

      10.1007/s12576-012-0222-y

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] ラット泌乳期におけるkisspeptin遺伝子の発現動態制御に関する分子組織化学的解析2013

    • Author(s)
      肥後 心平, 相川 優子, 小澤 一史
    • Organizer
      第118回日本解剖学会総会・全国学術集会
    • Place of Presentation
      香川県 かがわ国際会議場
    • Year and Date
      20130328-20130330
  • [Presentation] 視床下部kisspeptinニューロンにおけるコルチコトロピン放出ホルモン受容体とグルココルチコイド受容体の発現2013

    • Author(s)
      託見 健 , 飯島 典生, 肥後 心平, 小澤 一史
    • Organizer
      第118回日本解剖学会総会・全国学術集会
    • Place of Presentation
      香川県 かがわ国際会議場
    • Year and Date
      20130328-20130330
  • [Presentation] 全身麻酔薬セボフルランによるマウス視交叉上核の時計遺伝子mPer2 発現抑制に関するエピジェネティック解析2013

    • Author(s)
      森 啓介, 相川 優子, 肥後 心平, 松尾 いづみ, 飯島 典生, 坂本 篤裕, 小澤 一史
    • Organizer
      第118回日本解剖学会総会・全国学術集会
    • Place of Presentation
      香川県 かがわ国際会議場
    • Year and Date
      20130328-20130330

URL: 

Published: 2014-07-24  

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