2013 Fiscal Year Annual Research Report
レンチウイルスベクターを用いた筋ジストロフィー遺伝子治療
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24790891
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| Research Institution | Kumamoto University |
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Principal Investigator |
菅 智宏 熊本大学, 医学部附属病院, 非常勤診療医師 (90613521)
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| Keywords | レンチウイルスベクター / 筋ジストロフィー / 遺伝子治療 |
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| Research Abstract |
モデル動物にウイルスベクターを直接投与 (in vivo) し，骨格筋および心筋細胞に治療用遺伝子 (ジストロフィン遺伝子) を導入し長期間の遺伝子発現を観察し，病理学的，生理学的機能評価により有効性を検討した．
具体的にはマーカー遺伝子 (eGFP) ，複数の短縮型dystrophinとdystrophin/eGFP fusion 遺伝子を発現カセットにサブクローンし，シーケンシング，HEK293細胞などで蛋白を発現し，FACS，western blotting，免疫染色などで確認を行い，Lentivirus vector作成用カセットに挿入した．発現コントロールはCMV, RSV, CAGなどの非特異的プロモーター以外に、骨格筋特異的なHuman Skeletal α-Actin gene promoter (HSA), CK6 (modified Creatinin Kinase) などを用いた．プラスミドを大量精製後，パッケージング用プラスミド２種 (pCMV-VSVG-RSV-Rev, pCAG-HIVgp: 三好等の方法) ，ないし３種 (pRSV-REV, pCMV-VSVG, pRRLsin.cPPT-X-PRE: Naldini等の原法) とともにHEK293T細胞にトランスフェクションし，超遠心法によってウイルス液を濃縮精製した．
直接，モデル動物 (mdxマウス) にa) 直接筋注，b) 腹腔内投与を行った．接種後4週，4ヶ月，1年，2年を観察期間として，治療効果を判定した．骨格筋病理標本を作製しHE染色、mGomori染色など通常の染色方法に加え，抗dystrophin抗体染色，GFP (直接観察，必要に応じて抗GFP抗体を使用) ，dystrophin 関連タンパクを染色し評価した．また生理学的評価として骨格筋の収縮性・耐性の評価としてspecific forceとcontractionに対する耐性試験を行った．
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[Journal Article] Drastic therapy for listerial brain abscess by combination of hyperbaric oxygen therapy and antimicrobial agents: a case report2014
Author(s)
Nakahara K, Yamashita S, Ideo K, Shindo S, Suga T, Ueda A, Honda S, Hirahara T, Watanabe M, Yamashita T, Maeda Y, Yonemochi Y, Takita T, Ando Y
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Journal Title
Journal of Clinical Neurology
Volume: in press
Pages: in press
Peer Reviewed
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[Journal Article] Muscle biopsy findings predictive of malignancy in rare infiltrative dermatomyositis2013
Author(s)
Uchino M, Yamashita S, Uchino K, Mori A, Hara A, Suga T, Hirahara T, Koide T, Kimura E, Yamashita T, Ueda A, Kurisaki R, Suzuki J, Honda S, Maeda Y, Hirano T, Ando Y
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Journal Title
Clin Neurol Neurosurg
Volume: 115 (5)
Pages: 603-606
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] 喫煙2013
Author(s)
橋本 洋一郎, 渡利 茉里, 菅 智宏, 伊藤 康幸,徳永 誠
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Journal Title
Progress in Medicine
Volume: 33
Pages: 1765-1770
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[Presentation] 高気圧酸素療法と抗菌薬投与で著明に改善したリステリア脳膿瘍2013
Author(s)
中原 圭一, 井手尾 勝政, 進藤 誠悟, 菅 智宏, 植田 明彦, 本田 省二, 平原 智雄, 渡邉 聖樹, 山下 賢, 山下 太郎, 前田 寧, 米持 康寛, 田北 智裕, 安東 由喜雄
Organizer
第31回日本神経治療学会総会
Place of Presentation
東京ドームホテル（東京）
Year and Date
20131121-20131123
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[Presentation] 重症筋無力症における抗AchR抗体価のレベルと胸腺組織との関連2013
Author(s)
中原 圭一, 森 麗, 菅 智宏, 植田 明彦, 本田 省二, 平原 智雄, 渡邉 聖樹, 山下 賢, 山下 太郎, 前田 寧, 安東 由喜雄
Organizer
第54回日本神経学会学術大会
Place of Presentation
東京国際フォーラム（東京）
Year and Date
20130529-20130601
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[Presentation] 抗NMDA受容体脳炎症例と非脳炎症例の卵巣奇形腫では, MHC classIの発現が異なる2013
Author(s)
中西 俊人, 菅 智宏, 池田 徳典, 田山 親吾, 山下 賢, 山下 太郎, 前田 寧, 高橋 幸利, 田中 惠子, 片渕 秀隆, 安東 由喜雄
Organizer
第54回日本神経学会学術大会
Place of Presentation
東京国際フォーラム（東京）
Year and Date
20130529-20130601
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[Presentation] 非集積地における家族性アミロイドポリニューロパチー患者の臨床症候の検討2013
Author(s)
道鬼 つかさ, 山下 太郎, 大嶋 俊範, 森 麗, 菅 智宏, 本田 省二, 平原 智雄, 山下 賢, 前田 寧, 神力 悟, 大林 光念, 安東 由喜雄
Organizer
第54回日本神経学会学術大会
Place of Presentation
東京国際フォーラム（東京）
Year and Date
20130529-20130601
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[Presentation] 出産後に両側硬膜下血腫を来した2例
Author(s)
菅 智宏, 渡利 茉里, 伊藤 康幸, 山本 文夫, 橋本 洋一郎, 田尻 征治, 高田 明, 安東 由喜雄
Organizer
第204回日本神経学会九州地方会
Place of Presentation
久留米大学医学部教育1号館（久留米）
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[Presentation] 本邦初の家族性アミロイドポリニューロパチー (FAP ATTR Ala45Asp) の1症例
Author(s)
道鬼 つかさ, 三隅 洋平, 山下 太郎, 大林 光念, 神力 悟, 田崎 雅義, 大嶋 俊範, 菅 智宏, 平原 智雄, 植田 光晴, 渡邉 聖樹, 山下 賢, 前田 寧, 安東 由喜雄
Organizer
第202回日本神経学会九州地方会
Place of Presentation
佐賀大学医学部臨床大講堂（佐賀）
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