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2013 Fiscal Year Annual Research Report

レンチウイルスベクターを用いた筋ジストロフィー遺伝子治療

Research Project

Project/Area Number 24790891
Research InstitutionKumamoto University

Principal Investigator

菅 智宏  熊本大学, 医学部附属病院, 非常勤診療医師 (90613521)

Keywordsレンチウイルスベクター / 筋ジストロフィー / 遺伝子治療
Research Abstract

モデル動物にウイルスベクターを直接投与 (in vivo) し,骨格筋および心筋細胞に治療用遺伝子 (ジストロフィン遺伝子) を導入し長期間の遺伝子発現を観察し,病理学的,生理学的機能評価により有効性を検討した.
具体的にはマーカー遺伝子 (eGFP) ,複数の短縮型dystrophinとdystrophin/eGFP fusion 遺伝子を発現カセットにサブクローンし,シーケンシング,HEK293細胞などで蛋白を発現し,FACS,western blotting,免疫染色などで確認を行い,Lentivirus vector作成用カセットに挿入した.発現コントロールはCMV, RSV, CAGなどの非特異的プロモーター以外に、骨格筋特異的なHuman Skeletal α-Actin gene promoter (HSA), CK6 (modified Creatinin Kinase) などを用いた.プラスミドを大量精製後,パッケージング用プラスミド2種 (pCMV-VSVG-RSV-Rev, pCAG-HIVgp: 三好等の方法) ,ないし3種 (pRSV-REV, pCMV-VSVG, pRRLsin.cPPT-X-PRE: Naldini等の原法) とともにHEK293T細胞にトランスフェクションし,超遠心法によってウイルス液を濃縮精製した.
直接,モデル動物 (mdxマウス) にa) 直接筋注,b) 腹腔内投与を行った.接種後4週,4ヶ月,1年,2年を観察期間として,治療効果を判定した.骨格筋病理標本を作製しHE染色、mGomori染色など通常の染色方法に加え,抗dystrophin抗体染色,GFP (直接観察,必要に応じて抗GFP抗体を使用) ,dystrophin 関連タンパクを染色し評価した.また生理学的評価として骨格筋の収縮性・耐性の評価としてspecific forceとcontractionに対する耐性試験を行った.

  • Research Products

    (25 results)

All 2014 2013 Other

All Journal Article (11 results) (of which Peer Reviewed: 3 results) Presentation (12 results) Book (1 results) Remarks (1 results)

  • [Journal Article] 脳梗塞2014

    • Author(s)
      橋本 洋一郎, 渡利 茉里, 菅 智宏, 伊藤康幸
    • Journal Title

      診断と治療

      Volume: 102 (2014年増刊号) Pages: 129-137

  • [Journal Article] Drastic therapy for listerial brain abscess by combination of hyperbaric oxygen therapy and antimicrobial agents: a case report2014

    • Author(s)
      Nakahara K, Yamashita S, Ideo K, Shindo S, Suga T, Ueda A, Honda S, Hirahara T, Watanabe M, Yamashita T, Maeda Y, Yonemochi Y, Takita T, Ando Y
    • Journal Title

      Journal of Clinical Neurology

      Volume: in press Pages: in press

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] 脳梗塞と脳出血の再発率はどのくらい?2014

    • Author(s)
      菅 智宏, 橋本 洋一郎
    • Journal Title

      ブレインナーシング

      Volume: 30 Pages: 24-25

  • [Journal Article] 脳梗塞後になぜ脳出血が起こることがあるの?2014

    • Author(s)
      菅 智宏, 橋本洋一郎
    • Journal Title

      ブレインナーシング

      Volume: 30 Pages: 25-26

  • [Journal Article] Muscle biopsy findings predictive of malignancy in rare infiltrative dermatomyositis2013

    • Author(s)
      Uchino M, Yamashita S, Uchino K, Mori A, Hara A, Suga T, Hirahara T, Koide T, Kimura E, Yamashita T, Ueda A, Kurisaki R, Suzuki J, Honda S, Maeda Y, Hirano T, Ando Y
    • Journal Title

      Clin Neurol Neurosurg

      Volume: 115 (5) Pages: 603-606

    • DOI

      10.1016/j.clineuro.2012.07.019

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] 喫煙2013

    • Author(s)
      橋本 洋一郎, 渡利 茉里, 菅 智宏, 伊藤 康幸,徳永 誠
    • Journal Title

      Progress in Medicine

      Volume: 33 Pages: 1765-1770

  • [Journal Article] 脳卒中2013

    • Author(s)
      橋本 洋一郎, 菅 智宏, 伊藤 康幸
    • Journal Title

      medicina

      Volume: 50 (2013年増刊号) Pages: 290-295

  • [Journal Article] Multiple system atrophy in a patient with primary ciliary dyskinesia2013

    • Author(s)
      Sakaguchi H, Yamashita S, Suga T, Kimura E, Maeda Y, Hirano T, Uchino M
    • Journal Title

      Neurology Asia

      Volume: 18 Pages: 103-105

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] 第Xa因子阻害薬アピキサバンの登場2013

    • Author(s)
      橋本 洋一郎, 渡利 茉里, 菅 智宏, 伊藤 康幸
    • Journal Title

      ブレインナーシング

      Volume: 29 Pages: 708-709

  • [Journal Article] ワルファリンと新規経口抗凝固薬の切り替え―理論と実際―2013

    • Author(s)
      橋本 洋一郎, 渡利 茉里, 菅 智宏, 伊藤 康幸
    • Journal Title

      分子脳血管病

      Volume: 12 Pages: 362-368

  • [Journal Article] 皮質下脳梗塞2013

    • Author(s)
      橋本 洋一郎, 菅 智宏, 伊藤 康幸
    • Journal Title

      日本臨床 神経症候群 (第2版) I―その他の神経疾患を含めて―

      Volume: 別冊 Pages: 126-132

  • [Presentation] 脳脊髄液漏出症におけるRI脳槽シンチグラフィー施行症例の検討2014

    • Author(s)
      菅 智宏, 渡利 茉里, 伊藤 康幸, 俵 望, 山本 文夫, 光藤 尚, 橋本 洋一郎, 安東 由喜雄
    • Organizer
      第55回日本神経学会学術大会
    • Place of Presentation
      福岡国際会議場(福岡)
    • Year and Date
      20140521-20140524
  • [Presentation] アルテプラーゼ静注療法後の患者における急性期での新規経口抗凝固薬導入の検討2014

    • Author(s)
      渡利 茉里, 菅 智宏, 伊藤 康幸, 橋本 洋一郎
    • Organizer
      第39回日本脳卒中学会総会
    • Place of Presentation
      大阪国際会議場(大阪)
    • Year and Date
      20140313-20140315
  • [Presentation] 心房細動合併虚血性脳血管障害入院患者に対する急性期新規経口抗凝固薬の有効性と安全性の検討2014

    • Author(s)
      伊藤 康幸, 渡利 茉里, 菅 智宏, 橋本 洋一郎
    • Organizer
      第39回日本脳卒中学会総会
    • Place of Presentation
      大阪国際会議場(大阪)
    • Year and Date
      20140313-20140315
  • [Presentation] 高気圧酸素療法と抗菌薬投与で著明に改善したリステリア脳膿瘍2013

    • Author(s)
      中原 圭一, 井手尾 勝政, 進藤 誠悟, 菅 智宏, 植田 明彦, 本田 省二, 平原 智雄, 渡邉 聖樹, 山下 賢, 山下 太郎, 前田 寧, 米持 康寛, 田北 智裕, 安東 由喜雄
    • Organizer
      第31回日本神経治療学会総会
    • Place of Presentation
      東京ドームホテル(東京)
    • Year and Date
      20131121-20131123
  • [Presentation] 心房細動合併急性期虚血性脳血管障害入院患者に対する新規経口抗凝固薬の有効性と安全性の検討2013

    • Author(s)
      伊藤 康幸, 渡利 茉里, 菅 智宏, 橋本 洋一郎
    • Organizer
      第31回日本神経治療学会総会
    • Place of Presentation
      東京ドームホテル(東京)
    • Year and Date
      20131121-20131123
  • [Presentation] 健忘のみを呈した胃全摘後の一例と他のWernicke脳症との相違点2013

    • Author(s)
      伊藤 康幸, 渡利 茉里, 菅 智宏, 橋本 洋一郎
    • Organizer
      第37回日本神経心理学会総会
    • Place of Presentation
      札幌コンベンションセンター(札幌)
    • Year and Date
      20130912-20130913
  • [Presentation] 重症筋無力症における抗AchR抗体価のレベルと胸腺組織との関連2013

    • Author(s)
      中原 圭一, 森 麗, 菅 智宏, 植田 明彦, 本田 省二, 平原 智雄, 渡邉 聖樹, 山下 賢, 山下 太郎, 前田 寧, 安東 由喜雄
    • Organizer
      第54回日本神経学会学術大会
    • Place of Presentation
      東京国際フォーラム(東京)
    • Year and Date
      20130529-20130601
  • [Presentation] 抗NMDA受容体脳炎症例と非脳炎症例の卵巣奇形腫では, MHC classIの発現が異なる2013

    • Author(s)
      中西 俊人, 菅 智宏, 池田 徳典, 田山 親吾, 山下 賢, 山下 太郎, 前田 寧, 高橋 幸利, 田中 惠子, 片渕 秀隆, 安東 由喜雄
    • Organizer
      第54回日本神経学会学術大会
    • Place of Presentation
      東京国際フォーラム(東京)
    • Year and Date
      20130529-20130601
  • [Presentation] 非集積地における家族性アミロイドポリニューロパチー患者の臨床症候の検討2013

    • Author(s)
      道鬼 つかさ, 山下 太郎, 大嶋 俊範, 森 麗, 菅 智宏, 本田 省二, 平原 智雄, 山下 賢, 前田 寧, 神力 悟, 大林 光念, 安東 由喜雄
    • Organizer
      第54回日本神経学会学術大会
    • Place of Presentation
      東京国際フォーラム(東京)
    • Year and Date
      20130529-20130601
  • [Presentation] 出産後に両側硬膜下血腫を来した2例

    • Author(s)
      菅 智宏, 渡利 茉里, 伊藤 康幸, 山本 文夫, 橋本 洋一郎, 田尻 征治, 高田 明, 安東 由喜雄
    • Organizer
      第204回日本神経学会九州地方会
    • Place of Presentation
      久留米大学医学部教育1号館(久留米)
  • [Presentation] Osler-Weber-Rendu病に伴う肺動静脈瘻を介して奇異性脳塞栓症を来した1例

    • Author(s)
      宮川 展和, 菅 智宏, 渡利 茉里, 伊藤 康幸, 橋本 洋一郎, 安東 由喜雄
    • Organizer
      第305回日本内科学会九州地方会
    • Place of Presentation
      くまもと森都心プラザホール(熊本)
  • [Presentation] 本邦初の家族性アミロイドポリニューロパチー (FAP ATTR Ala45Asp) の1症例

    • Author(s)
      道鬼 つかさ, 三隅 洋平, 山下 太郎, 大林 光念, 神力 悟, 田崎 雅義, 大嶋 俊範, 菅 智宏, 平原 智雄, 植田 光晴, 渡邉 聖樹, 山下 賢, 前田 寧, 安東 由喜雄
    • Organizer
      第202回日本神経学会九州地方会
    • Place of Presentation
      佐賀大学医学部臨床大講堂(佐賀)
  • [Book] 筋疾患診療ハンドブック (横紋筋融解症)2013

    • Author(s)
      菅 智宏, 内野 誠 監修, 青木 正志 編集
    • Total Pages
      202 (51-56)
    • Publisher
      中外医学社
  • [Remarks] 熊本大学神経内科ホームページ

    • URL

      http://www2.kuh.kumamoto-u.ac.jp/neurology/

URL: 

Published: 2015-05-28  

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