2012 Fiscal Year Research-status Report
マクロファージ特異的ＡＭＰＫ活性調節を介した動脈硬化発症抑制の試みと分子機序解明
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24790930
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| Research Institution | Kumamoto University |
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Principal Investigator |
石井 規夫 熊本大学, 医学部附属病院, 医員 (10599111)
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| Project Period (FY) |
2012-04-01 – 2014-03-31
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| Keywords | マクロファージ / AMPK / 動脈硬化 / 細胞周期 |
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| Research Abstract |
① マウス腹腔Mφにおいて、AMPK活性化剤（AICAR）は、濃度依存性にAMPKのThr172をリン酸化し、主要な下流分子であるACCのリン酸化を誘導した。また、この効果はAICAR添加後1時間以内で誘導され、24時間以上持続した。
② マウス腹腔Mφおいて、AICARは酸化LDLあるいは分化誘導因子Granulocyte Macrophage colony-stimulating Factor（GM-CSF）により誘導されたMφ増殖を濃度依存性に有意に抑制した。
③ DN-AMPKを遺伝子導入し過剰発現させたMφでは、AICARにより誘導されるAMPKのリン酸化が誘導されず、下流のACCのリン酸化も誘導されなかった。このMφでは、AICARによる酸化LDL誘導性マクロファージ増殖の抑制効果が解除された。
④ GM-CSF誘導性MφにおいてはAICAR添加によりG0/G1期にあるMφの増加と、S期とG2/M期にあるMφの減少を認めた。
⑤ Apo E欠損マウスにAICAR投与することで脂質プロファイルに有意な変化は認めなかったが、AICAR投与群ではCTRL群と比較し有意に動脈硬化巣が縮小していた。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
残念ながらAICARによるマクロファージのフェノタイプの変化は仮説通りにはいかなかったが、それ以外は順調に結果が出ている。in vivoの検討で動脈硬化抑制効果が観察され、in vitoにおけるAICARの効果がin vivoでも同様に起きている可能性がある。さらに観察を進めていく。
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| Strategy for Future Research Activity |
①動脈硬化モデルマウス(アポE欠損マウス)の大動脈弁輪部の組織薄切切片及び大動脈全体をenfaceした組織サンプルをOil-red O染色し粥状動脈硬化病変のサイズを定量化する。
②大動脈弁輪部の連続切片を用いてMφ特異的な表面抗原マーカー(CD11b)と細胞増殖のマーカー(PCNA)で多重免疫染色を行い増殖細胞と一致の程度を評価する。
③アポE欠損マウスにAICARを8～10週間連日皮下注射投与後にsacrifyし、上記≪実験II≫と同様の検討で動脈硬化病変のサイズを定量化し増殖細胞およびMφについてコントロールマウスと比較検討する。
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| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
マウス解析のために、おもに細胞培養液・細胞調節液、Western blot用抗体・試薬、mRNA抽出及びPCR用試薬、免疫組織染色用抗体・試薬、FACS抗体・試薬マウス購入費マウス飼育維持費その他試薬が必要となる。
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[Journal Article] Regulation of TNFα converting enzyme activity in visceral adipose tissue of obese mice.2013
Author(s)
Kawasaki S, Motoshima H, Hanatani S, Takaki Y, Igata M, Tsutsumi A, Matsumura T, Kondo T, Senokuchi T, Ishii N, Kinoshita H, Fukuda K, Kawashima J, Shimoda S, Nishikawa T, Araki E.
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Journal Title
Biochem Biophys Res Commun
Volume: 430
Pages: 1189-1194
Peer Reviewed
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[Journal Article] Apocynin suppresses the progression of atherosclerosis in apoE-deficient mice by inactivation of macrophages.2013
Author(s)
Kinoshita H, Matsumura T, Ishii N, Fukuda K, Senokuchi T, Motoshima H, Kondo T, Taketa K, Kawasaki S, Hanatani S, Takeya M, Nishikawa T, Araki E
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Journal Title
Biochem Biophys Res Commun
Volume: 431
Pages: 124-130
Peer Reviewed
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