消化器癌におけるＣＤＨ３プロモーター領域の脱メチル化の意義

2012 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 24791384
• Research Category: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• Research Institution: Kumamoto University
• Principal Investigator: 今井 克憲 熊本大学, 医学部附属病院, 医員 (60555746)
• Project Period (FY): 2012-04-01 – 2015-03-31
• Keywords: P-cadherin / CDH3 / 脱メチル化 / 肝内胆管癌

Research Abstract

当科において外科的に切除された肝内胆管癌59例に対しP-cadherinの免疫染色を行った。P-cadherinの発現は、腫瘍径（p=0.0006）およびリンパ節転移の有無（p=0.044）と有意に相関していた。P-cadherin高発現群（n=30）と低発現群（n=29）に分けて予後解析を行ったところ、5年無再発生存率は14.3%と44.8%、5年生存率は36.7%と76.1%で、無再発生存、生存ともにP-cadherin高発現群で有意に不良であった（p=0.019およびp=0.0012、log-rank test）。Cox比例ハザードモデルを用いた多変量解析の結果、P-cadherinの高発現は、再発の独立規定因子であった（ハザード比3.67、p=0.008）。
胆管癌細胞株においてRT-PCR、Western blot法によりP-cadherin mRNAおよび蛋白の発現解析を行ったところ、7種中3種で高発現を認めた。P-cadherin高発現株であるHuCCT-1においてsi-RNAを用いてP-cadherinのknockdownを行うと、増殖能は不変であったが、浸潤能、遊走能が有意に低下した。
胆管癌細胞株において、メチル化特異的PCRの手法を用いてP-cadherinのプロモーター領域のメチル化の有無を検討したところ、P-cadherin高発現株ではプロモーター領域の脱メチル化を認める傾向にあった。P-cadherin低発現株であるSSP25に5-AZAを添加すると同部は脱メチル化されたが、それに伴ってP-cadherinの発現上昇を認めた。
以上より、胆管癌においてP-cadherinの発現は浸潤、遊走能の上昇を介して癌の悪性化に寄与しており、その発現にはプロモーター領域の脱メチル化が関与している可能性が示唆された。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

実際の臨床検体を用いてP-cadherinのプロモーター領域のメチル化状態の検証を行っているが、特異的なバンドがなかなか得られない状況である。現在実験プロトコールの検討を行い、条件等の検証を行っている。

Strategy for Future Research Activity

胆管癌の凍結標本よりDNAの抽出を行い、P-cadherinのプロモーター領域のメチル化状態をメチル化特異的PCRにて検証し、P-cadherinの発現とプロモーター領域のメチル化の相関を検証する。さらに、癌部のみでなく非癌部におけるP-cadherinの発現とプロモーター領域のメチル化を検討し、非癌部の脱メチル化が臨床病理学的因子に及ぼす影響を検証する。
その他、現在膵癌においても同様に、発現と予後の関連を検討し、細胞株及び臨床検体においてP-cadherin発現とプロモーター領域のメチル化の関連を検証している。

Expenditure Plans for the Next FY Research Funding

該当なし