2012 Fiscal Year Research-status Report
着床前期胚特異的な遺伝子のｉＰＳ作成における機能解析
| Project/Area Number |
24791691
|
|---|
| Research Institution | The University of Tokyo |
|---|
Principal Investigator |
平田 哲也 東京大学, 医学部附属病院, 助教 (30431860)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2012-04-01 – 2014-03-31
|
| Keywords | iPS / Zscan4 |
|---|
| Research Abstract |
①MEF-ZERTにMKOSを導入したところ、Tmx+はTmx-に比較し、iPS作製効率は1.5～2倍であった。これらのiPSは、3胚葉に分化し、tetraploid complementation testにて胎児が得られた。
②MEF-ZERTにKOSを導入したところ、Tmx+はTmx-に比較し、iPS作製効率は40～70倍に上がり、さらにTmx+の期間を最初の7日間、4日間、1日間と短縮しても作製効率は改善した。このiPSはtetraploid complementation testにて胎児が得られた。
③MEF-KOS-ZERTにおいて、Dox+の条件下でTmx+とTmx-を比較すると、17日目の時点でTmx+はTmx-に比較し、劇的にiPSの作製効率が上昇した。
④MEF-KOS-ZERTにおいて、Dox+の条件下でTmx+とTmx-の遺伝子発現プロファイルを比較すると、iPS作製効率の大きな差にも関わらず、発現の差は、1日目で28遺伝子、3日目に162遺伝子、6日目に237遺伝子だけであった。重複を除いた231遺伝子がZscan4の活性化によって発現が上昇している遺伝子であったが、そのうち27遺伝子が着床前期胚、14遺伝子が卵細胞、37遺伝子が卵巣、精巣に特異的であった。これらの遺伝子群は、Mycを加えたMKOSによるiPS作製早期においても活性化されていなかった。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
1: Research has progressed more than it was originally planned.
Reason
申請書提出時にはベクターのconstructonが全て行われていたため、非常にスムーズに研究に移ることができたため。
|
| Strategy for Future Research Activity |
マウスについてはある程度証明することができため、ヒトのiPS細胞につき検討を進めていく。
|
| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
Mouseでの結果に基づき、humanのfibroblastを用いたiPS作成にhuman Zscan4(hZscan4)を用いる。予備的なデータとして、hZscan4をMEFに導入したところiPSの作成効率を上げることを既に確認している。そこで、まずhZscan4がヒトのfibroblastに導入してiPSの作成効率が促進されるかどうかにつき検討する。また、得られたiPSに関しては、PCR、免疫染色法によりnanog, Tra1-60などの多能性幹細胞マーカーの発現を確認する。さらに、このiPSが三胚葉に分化することを免疫染色法で確認する。さらに多能性を確認する上で、得られたiPSをSCID mouseの皮下もしくは腹腔内に注入し、奇形腫を形成し三胚葉に分化するかどうか検討する。特にhuman iPSは、mouseに比較して核型が非常に崩れやすいことが分かっている。。そこで、hZscan4もマウスのZscan4と同様に核型の維持に働くかどうかについても比較検討する。
|
-
-
[Journal Article] Systematic repression of transcription factors reveals limited patterns of gene expression changes in ES cells.2012
Author(s)
Nishiyama A, Sharov AA, Piao Y, Amano M, Amano T, Hoang HG, Correa-Cerro LS, Meyers E, Sharova L, Qian Y, Hirata T, Longo DL, Schlessinger D, Ko MS.
-
Journal Title
scientific reports
Volume: 3
Pages: 1390
DOI
Peer Reviewed
-
[Journal Article] Interleukin-1β stimulates the secretion of thymic stromal lymphopoietin (TSLP) from endometrioma stromal cells: possible involvement of TSLP in endometriosis.2012
Author(s)
Urata Y, Osuga Y, Izumi G, Takamura M, Koga K, Nagai M, Harada M, Hirata T, Hirota Y, Yoshino O, Taketani Y.
-
Journal Title
human reproduction
Volume: 10
Pages: 3028-3035
DOI
-
-
