2012 Fiscal Year Research-status Report
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24791882
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
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| Research Institution | University of Occupational and Environmental Health, Japan |
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Principal Investigator |
宮本 直哉 産業医科大学, 医学部, 助教 (30620570)
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| Project Period (FY) |
2012-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | 緑内障 / 線維柱帯 / 酸化ストレス |
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| Research Abstract |
我々は、培養線維柱帯細胞を使用し酸化ストレスと緑内障発症に関するメカニズムに関して検討を行っている。酸化ストレスの強さと緑内障進行とがパラレルに進行することが報告されたことや、実際に緑内障の患者では線維柱帯細胞のアポトーシスが起こり、そこに細胞外マトリックスが沈着することが眼圧上昇に関わっていることが知られたためである。そこで今回、長寿や酸化ストレス耐性に関係することが知られてるsirt1遺伝子について検討を行った。正常の患者から培養した線維柱帯細胞よりも緑内障由来の線維柱帯細胞の方がsirt1の発現量が多いことをwestern blot法で確認した。また、sirt1遺伝子をsiRNA法を用いてknockdownし、酸化ストレス感受性に関してWST8 assayを行うと、sirt1を抑制すると感受性が上がり、線維柱帯細胞においてsirt1は酸化ストレス耐性に関与することが分かった。また、sirt1遺伝子の発現メカニズムを調べるため、プロモーター領域をコンピュータ解析した結果、E-box結合配列が存在することがわかり、E-box結合転写因子のひとつであるc-mycで制御されることを、siRNA法やLuciferase assayを用いることで確認した。
さらに、緑内障点眼薬であるPG製剤でc-myc/sirt1転写システムが誘導されることをwestern blot法で確認した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
実験計画に則り実験を行っており、研究結果は現在順調に出ており概ね順調に進んでいると考える。
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| Strategy for Future Research Activity |
①sirt1のプロモーター領域にはE-boxが数か所存在するため、mutationやdeletionを導入しさらなる解析を進める。
②PG製剤はPG receptorを介して作用するため、受容体を介する作用なのかそうでないのかを確認するため、PG receptorをsiRNAでknockdownするか、antagonistを用いることで確認する。
③実際にPG製剤を加えることで酸化ストレスに対して感受性が変化するのか確認するため、WST8 assayを行う。
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| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
おもに実験に関する消耗品や研究成果を国外に発表する旅費に使用する予定である。
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