腫瘍血管内皮細胞における特異的ｍｉＲＮＡの発現解析

2012 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 24791958
• Research Category: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• Research Institution: Hokkaido University
• Principal Investigator: 秋山 廣輔 北海道大学, 歯学研究科(研究院), 特任助教 (10609100)
• Project Period (FY): 2012-04-01 – 2015-03-31
• Keywords: 血管新生阻害剤

Research Abstract

近年、癌治療において腫瘍血管を攻撃して癌を兵糧攻めにし、癌の血行性転移を抑制する目的で血管新生阻害療法が開発、実用化されてきた。腫瘍血管内皮細胞は正常血管内皮細胞と異なることを当教室では報告してきており、申請者らは、正常血管内皮と腫瘍血管内皮の分子的な違いを標的とする腫瘍血管特異的な新規血管新生阻害剤の開発が可能ではないかと考えた。申請者らは、正常血管内皮が腫瘍微小環境において異常性を獲得することを報告してきた。そのメカニズムの一つに、腫瘍細胞由来因子による正常血管内皮細胞のDNAメチル化や、ヒストン脱アセチル化などエピジェネティックな異常の関与が示唆される。近年、これらエピジェネティックな異常はmicro RNA(miRNA)とよばれる低分子RNAによって制御されることが明らかになりつつある。さらに申請者らはこれまでの研究で、腫瘍培養上清中に微小胞でつつまれた腫瘍細胞由来のmiRNAが含まれていることを明らかにしてきた。本研究は正常血管内皮細胞と比較し、腫瘍血管内皮細胞に特異的なmiRNAの発現解析を行うとともに、その標的遺伝子の同定および機能解析を行う。
H24年度は舌癌をはじめとしたヒト腫瘍細胞のヌードマウス皮下移植腫瘍塊から腫瘍血管皮細胞を、正常マウス皮膚からは正常血管内皮細胞を分離・培養した。PCR法とフローサイトメーターを用いて、分離した血管内皮の特性解析をおこなった。解析の結果、純度の高い血管内皮細胞の分離ができており、今後正常血管内皮細胞と腫瘍血管内皮細胞のmiRNAの発現解析、標的的遺伝子同定、機能解析を円滑に行う上で非常に重要な成果である。
現在、miRNA Micro Array解析用の正常血管内皮細胞と腫瘍血管内皮細胞を培養中である。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

正常皮膚、及び腫瘍組織から分離できる血管内皮細胞は非常にわずかなポピュレーションである。また分離後、順調に細胞が増殖するまで時間がかかったため。
以上の理由により、miRNA MicroArray解析をH24年度中に達成することができなかった。

Strategy for Future Research Activity

今後は、MicroArray解析をすすめるとともに、当初の研究計画通りに正常血管内皮と腫瘍血管内皮におけるmiRNAの発現比較、その機能解析、そして目的miRNAを標的とした血管新生阻害剤の検討をin vivoで行っていく。

Expenditure Plans for the Next FY Research Funding

H24度に行うことができなかった①miRNA MicroArrayの解析、血管内皮細胞を用いての機能解析を進めるにあたり、②血管内皮専用培地、③標的miRNAをノックダウンするsiRNA試薬、などの消耗品に充てる予定である。

Research Products

• [Journal Article] Tumor endothelial cells acquire drug resistance in a tumor microenvironment (2013)
  • Author(s): Hida K., Akiyama K., Ohga N., Maishi N., Hida Y
  • Journal Title: J Biochem Volume: 153 Pages: 243-249
  • DOI: 10.1093/jb/mvs152
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] The F-prostaglandin receptor is a novel marker for tumor endothelial cells in renal cell carcinoma (2013)
  • Author(s): Akiyama K., Ohga N., Maishi N., Hida Y., Kitayama K., Kawamoto T., Osawa T., Suzuki Y., Shinohara N., Nonomura K., Shindoh M., Hida K.
  • Journal Title: Pathology International Volume: 63 Pages: 37-44
  • DOI: 10.1111/pin.12031.
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Tumor-derived microvesicles induce proangiogenic phenotype in endothelial cells via endocytosis (2012)
  • Author(s): Kawamoto T., Ohga N. , Akiyama K., Hirata N., Kitahara S, Maishi N., Osawa T., Yamamoto K., Kondoh M., Shindoh M., Hida Y., Hida K.
  • Journal Title: PLoS ONE Volume: なし
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0034045.
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Biglycan is a specific marker and an autocrine angiogenic factor of tumour endothelial cells (2012)
  • Author(s): Yamamoto K. , Ohga N., Hida Y., Maishi N., Kawamoto T., Kitayama K., Akiyama K., Osawa T., Kondoh M., Matsuda K., Onodera Y., Fujie M., Kaga K., Hirano S, Shinohara N., Shindoh M., Hida K.
  • Journal Title: British Journal of Cancer Volume: 106 Pages: 1214-1223
  • DOI: doi: 10.1038/bjc.2012.59.
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Prostacyclin receptor in tumor endothelial cells promotes angiogenesis in an autocrine manner (2012)
  • Author(s): Osawa T., Ohga N. , Hida Y., Kitayama K., Akiyama K., Onodera Y., Fujie M., Shinohara N., Nonomura K., Shindoh M. , Hida K
  • Journal Title: Cancer Science Volume: 103 Pages: 1038-1044
  • DOI: 10.1111/j.1349-7006.
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] CXCR7 : A novel tumor endothelial marker in renal cell carcinoma (2012)
  • Author(s): Maishi N., Ohga N., Hida Y., Akiyama K., Kitayama K., Osawa T., Onodera Y., Nonomura K., Shinohara N., Shindoh M., Hida K .
  • Journal Title: Pathology International Volume: 62 Pages: 309-317
  • DOI: 10.1111/j.1440-1827.2012.02792.x.
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Heterogeneity of Tumor Endothelial Cells: Comparison between Tumor Endothelial Cells Isolated from Highly Metastatic and Low Metastatic Tumors (2012)
  • Author(s): Ohga N., Ishikawa S., Maishi N., Akiyama K., Hida Y., Kawamoto T., Sadamoto Y., Osawa T.,Yamamoto K., Kondoh M., Ohmura H., Shinohara N., Nonomura K., Shindoh M., Hida K.
  • Journal Title: American Journal of Pathology Volume: 180 Pages: 1294-1307
  • DOI: 10.1016/j.ajpath.2011.11.035.
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Tumor endothelial cells acquire drug resistance by MDR1 upregulation via VEGF signaling in tumor microenvironment (2012)
  • Author(s): Akiyama K., Ohga N., Hida Y., Kawamoto T., Sadamoto Y., Ishikawa S., Maishi N., Akino T., Kondoh M., Matsuda A., Inoue N., Shindoh M. and Hida K
  • Journal Title: American Journal of Pathology Volume: 180 Pages: 1283-1293
  • DOI: 10.1016/j.ajpath.2011.11.029.
  • Peer Reviewed
• [Presentation] Tumor endothelium acquires drugresistance by MDR1/P-gp upregulationand metronomic chemotherapycombined with P-gp inhibitor enhancesantiangiogenic activity in vivo (2012)
  • Author(s): Akiyama K., Ohga N., Hida Y., Maishi N., Alam Mohammad Towfik., Kawamoto T., Omura H., Yamada K., Torii C., Sakamoto H. Matsuda A., Hida K
  • Organizer: The 20th annual Meeting of the Japanese Vascular Biology and MedicineOrganization, The 10th Korea-Japan Joint Symposium on Vascular Biology
  • Place of Presentation: あわぎんホール（徳島市）
  • Year and Date: 20121205-20121207
• [Presentation] Characterization of stem-like tumor endothelial cells (2012)
  • Author(s): Hida K., Omura H., Akiyama K., Ohga N., Maishi N., Kawamoto T., Kondoh M., Hida Y.
  • Organizer: The 20th annual Meeting of the Japanese Vascular Biology and MedicineOrganization, The 10th Korea-Japan Joint Symposium on Vascular Biology
  • Place of Presentation: あわぎんホール（徳島市）
  • Year and Date: 20121205-20121207
• [Presentation] Hypoxia induces angiogenic factors andaneuploidy in micirovascular endothelialcells (2012)
  • Author(s): Kondoh M., Ohga N., Akiyama K., Maishi N., Kawamoto T., Hida Y., Shindoh M., Hida K.
  • Organizer: The 20th annual Meeting of the Japanese Vascular Biology and MedicineOrganization, The 10th Korea-Japan Joint Symposium on Vascular Biology
  • Place of Presentation: あわぎんホール（徳島市）
  • Year and Date: 20121205-20121207
• [Presentation] The role of Lysyl oxidase on proangiogenic phenotypes of tumor endothelial cells (2012)
  • Author(s): Akiyama K., Osawa T., Ohga N., Hida Y., Kitayama K., Kawamoto T., Yamamoto Y., Maishi N., Kondoh M., Shinohara N., Nonomura K., Shindoh M., Hida K
  • Organizer: The 71st Annual Meeting of the Japanese Cancer Association
  • Place of Presentation: ホテルさっぽろ芸文館（札幌市）
  • Year and Date: 20120919-20120921
• [Presentation] Tumor-derived microvesicles induce proangiogenic phenotype in endothelial cells via endocytosis (2012)
  • Author(s): Kawamoto T., Ohga N., Akiyama K., Hirata N., Kitahara S., Maishi N., Osawa T., Yamamoto K., Kondoh M., Shindoh M., Hida Y., Hida K
  • Organizer: The 71st Annual Meeting of the Japanese Cancer Association
  • Place of Presentation: ホテルさっぽろ芸文館（札幌市）
  • Year and Date: 20120919-20120921
• [Presentation] Biglycan is a specific marker and an autocrine angiogenic factor of tumour endothelial cells, (2012)
  • Author(s): Ohga N. ,Yamamoto K. , Hida Y., Akiyama K., Maishi N., Kawamoto T., Kitayama K., Osawa T., Hirano S, Shinohara N., Shindoh M
  • Organizer: The 71st Annual Meeting of the Japanese Cancer Association
  • Place of Presentation: ホテルさっぽろ芸文館（札幌市）
  • Year and Date: 20120919-20120921
• [Presentation] The role of tumor endothelial cells in tumor metastasis (2012)
  • Author(s): Maishi N., Ohba Y., Ohga N., Akiyama K., Yamamoto Y., Hamada J., Kawamoto T., Osawa T., Kondoh M., Omura H., Shindoh M., Hida Y., Hida K
  • Organizer: The 71st Annual Meeting of the Japanese Cancer Association
  • Place of Presentation: ホテルさっぽろ芸文館（札幌市）
  • Year and Date: 20120919-20120921
• [Presentation] Characterization of Aldehyde dehydrogenase(ALDH) positive tumor endothelial cells (2012)
  • Author(s): Omura H., Akiyama K., Ohga N., Maishi N., Hida Y., Kawamoto T., Kondoh M., Osawa T., Yamamoto Y., Iida J., Shindoh M., Hida K
  • Organizer: The 71st Annual Meeting of the Japanese Cancer Association
  • Place of Presentation: ホテルさっぽろ芸文館（札幌市）
  • Year and Date: 20120919-20120921
• [Presentation] 腫瘍血管内皮細胞のプロスタサイクリン受容体は血管新生をオートクラインに促進する (2012)
  • Author(s): 土屋邦彦、大澤崇宏、大賀則孝、樋田泰浩、北山和子、秋山廣輔、小野寺雄一郎、篠原信雄、藤江学、進藤正信、野々村克也、樋田京子
  • Organizer: 第71回日本癌学会学術総会
  • Place of Presentation: ホテルさっぽろ芸文館（札幌市）
  • Year and Date: 20120919-20120921
• [Presentation] 腫瘍血管内皮細胞のがん転移への関わり (2012)
  • Author(s): 間石奈湖、大場雄介、山本和幸、大賀則孝、浜田淳一、秋山廣輔、川本泰輔、大澤崇宏、近藤美弥子、大村瞳、樋田泰浩、樋田京子
  • Organizer: 第21回日本がん転移学会学術集会・総会
  • Place of Presentation: オリエンタルホテル広島（広島市）
  • Year and Date: 20120712-20120713
• [Presentation] 腫瘍血管内皮細胞におけるALDHの発現解析とALDH高活性血管内皮細胞の特性解析 (2012)
  • Author(s): 大村瞳、大賀則孝、樋田泰浩、秋山廣輔、間石奈湖、近藤美弥子、大澤崇宏、山本和幸、川本泰輔、飯田順一郎、進藤正信、樋田京子
  • Organizer: 第21回日本がん転移学会学術集会・総会
  • Place of Presentation: オリエンタルホテル広島（広島市）
  • Year and Date: 20120712-20120713
• [Presentation] Tumor-derived microvesicles induce proangiogenic phenotype in endothelial cells via endocytosis (2012)
  • Author(s): 川本泰輔、大賀則孝、秋山廣輔、間石奈湖、大澤崇宏、山本和幸、近藤美弥子、進藤正信、樋田泰浩、樋田京子
  • Organizer: 第28回日本DDS学会学術集会
  • Place of Presentation: 札幌コンベンションセンター（札幌市）
  • Year and Date: 20120704-20120706
• [Presentation] 転移能の異なる腫瘍由来の血管内皮の特性解析 (2012)
  • Author(s): 大賀則孝、石川修平、樋田泰浩、秋山廣輔、間石奈湖、川本泰輔、進藤正信、樋田京子
  • Organizer: 第28回日本DDS学会学術集会
  • Place of Presentation: 札幌コンベンションセンター（札幌市）
  • Year and Date: 20120704-20120706
• [Presentation] Biglycan is a specific marker and an autocrine angiogenic factor of tumor endothelial cells (2012)
  • Author(s): Yamamoto K., Ohga N., Hida Y., Maishi N., Kawamoto T., Kitayama K., Akiyama K., Osawa T., Kondoh M., Kaga K., Shinohara N., Shindoh M., Hirano S., Hida K.
  • Organizer: the 17th International Vascular Biology Meeting
  • Place of Presentation: Rein-Main-Hallen(Wiesbaden, Germany）
  • Year and Date: 20120602-20120605
• [Presentation] Tumor endothelial cell s acquire drug resistance by MDR1 upregulation (2012)
  • Author(s): Hida K., Akiyama K., Ohga N., Hida Y., Kawamoto T., Sadamoto Y., Maishi N., Akino T., Kondoh M., Shindoh M
  • Organizer: the 17th International Vascular Biology Meeting
  • Place of Presentation: Rein-Main-Hallen(Wiesbaden, Germany）
  • Year and Date: 20120602-20120605
• [Presentation] Tumor-derived microvesicles induce proangiogenic phenotype in endothelial cells via endocytosis (2012)
  • Author(s): Kawamoto T., Ohga N., Akiyama K., Hirata N., Kitahara S., Maishi N., Osawa T., Yamamoto K., Kondoh M., Shindoh M., Hida Y., Hida K
  • Organizer: the 17th International Vascular Biology Meeting
  • Place of Presentation: Rein-Main-Hallen(Wiesbaden, Germany)
  • Year and Date: 20120602-20120605
• [Presentation] 腫瘍微小環境におけるVEGFシグナルを介したMDR1の発現亢進による血管内皮細胞の薬剤抵抗性獲得について (2012)
  • Author(s): 秋山廣輔、大賀則孝、樋田泰浩、川本泰輔、定本圭弘、石川修平、間石奈湖、秋野文臣、近藤美弥子、松田彩、井上農夫男、進藤正信、樋田京子
  • Organizer: 第66回日本口腔科学会学術集会
  • Place of Presentation: 広島国際会議場（広島市）
  • Year and Date: 20120517-20120518
• [Presentation] 腫瘍微小 環境におけるVEGFシグナルを介したMDR1の発現亢進による血管内皮細胞の薬剤抵抗性獲得について (2012)
  • Author(s): 秋山廣輔、大賀則孝、樋田泰浩、川本泰輔、定本圭弘、石川修平、近藤美弥子、間石奈湖、大澤崇宏、山本和幸、進藤正信、樋田京子
  • Organizer: 第101回日本病理学会総会
  • Place of Presentation: 京王プラザホテル（東京都）
  • Year and Date: 20120426-20120428