ＨＭＧＡ２ｖ２による標的遺伝子発現制御と口腔癌進展機構の解析

2012 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 24792012
• Research Institution: The Nippon Dental University
• Principal Investigator: 前田 元太 日本歯科大学, 生命歯学部, 助教 (80434140)
• Project Period (FY): 2012-04-01 – 2014-03-31
• Keywords: EMT / 口腔扁平上皮癌 / HMGA2

Research Abstract

上皮系がんが進展する過程で、胎生期未分化間葉系細胞に特異的な転写因子high mobility group-A2(HMGA2)の異所発現は癌細胞に上皮間葉移行（EMT）を誘導し、高度悪性型表現型を獲得させる。1年目は口腔癌細胞が発現する内在性HMGA2アイソフォーム（HMGA2v2）がプロモーター領域を共有する標的群（ZIC1,ZIC2）発現にはたす必需性と他の転写因子との相互作用による発現制御機構を詳細に解析した。
口腔癌細胞ならびに正常口腔上皮株化細胞におけるHMGA2アイソフォームの発現解析をRealtime PCRにより行った。その結果、正常口腔上皮株化細胞と比べ口腔癌細胞ではHMGA2アイソフォーム１とアイソフォーム２の両方とも発現の増加を認めた。またHMGA２アイソフォーム１、並び２のオープンリーディングフレームを発現ベクターに組み込み、そのベクターをエレクトロぽレーションによりそれぞれの細胞に導入し発現の増加を確認した。
Zic1/4遺伝子発現機構の解析。Zic1とZic４のプロモーター領域をさまざまな長さに断片化し、レポートアッセイ用プラスミド（pGL-4.1）に組み込み、口腔癌細胞におけるZic１/4遺伝子プロモーター領域に結合する転写因子の位置を特定した。その結果、HMGA2の高発現する口腔扁平上皮癌細胞では、ZIC１のプロモーター領域に強く転写因子が結合していることが分かった。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

口腔癌細胞細胞株と正常口腔扁平上についてHMGA2の発現（アイソフォーム１，２）の発現の確認、及び発現ベクターを導入した細胞株におけるHMGA2の発現動態の確認を行った。さらに、HMGA２の発現がZIC1とZIC４のプロモーター領域に結合する転写因子の増減に関与ことが推測された。これは申請書に記載した計画をほぼ遂行しており順調に進展している。

Strategy for Future Research Activity

ZIC1とZIC4の発現が口腔癌細胞の発現系に与える影響とそのHMGA2依存性を証明する。すなわち、種々のin vitroアッセイで癌細胞の増殖能、足場依存性増殖能、遊走能、浸潤能およびEMT誘導能を明らかにする。またマウス同所移植モデルを利用して、生体内における造腫瘍性、発育能、浸潤・転移能を比較するとともに、in vitroアッセイ系で得られた結果が生体内で再現されるかを検証する。

Expenditure Plans for the Next FY Research Funding

該当なし