ヒト肺胞上皮前駆細胞の分化を制御するｍｉｃｒｏＲＮＡの同定

2012 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 24890016
• Research Institution: Tohoku University
• Principal Investigator: 藤野 直也 東北大学, 医学(系)研究科(研究院), 非常勤講師 (10633670)
• Project Period (FY): 2012-08-31 – 2014-03-31
• Keywords: 組織幹細胞 / 修復 / 肺胞上皮前駆細胞 / II型肺胞上皮細胞 / microRNA

Research Abstract

肺胞上皮前駆細胞は，ヒト成人肺組織から分離した新規細胞群で，自己複製能と肺胞II型上皮細胞 (II型細胞) や間葉系細胞への多分化能を有し，特発性肺線維症の上皮修復部分に局在している (Fujino N, et al. Lab Invest.91 :363,2011)．そのため，肺胞上皮前駆細胞の機能（増殖能・分化能）を制御する因子を同定することは，特発性肺線維症等の難治性肺疾患の病態を理解し，新しい治療戦略を開発するために重要であると考えられる．本研究の目的は，ヒト肺胞上皮前駆細胞の肺胞上皮細胞分化を制御するmicroRNA (miRNA) を同定し，miRNAに基づいた肺胞上皮修復促進剤の創薬シーズを開発することである．
平成24年度は，前駆細胞およびII型細胞からtotal RNAを分離し，前駆細胞およびII型細胞の網羅的miRNA発現プロファイルを明らかにした．今後，前駆細胞で発現が増加しているmiRNA，II型細胞で発現が増加しているmiRNAを同定する．また，前駆細胞の肺胞上皮細胞分化を制御するmiRNA群を決定するため，前駆細胞で発現が増加しているmiRNAに対するmiRNA阻害剤，II型細胞で発現が増加しているmiRNAに対するmiRNA mimicを前駆細胞群へ投与することを検討している．
平成24年度繰越分を用いて，平成25年度はmiRNA mimicおよびmiRNA inhibitor導入の至適化を行った．

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

平成24年12月までに，ヒト肺胞上皮前駆細胞およびヒトII型肺胞上皮細胞からmicroRNAを分離し，microRNA arrayによるmicroRNA発現解析を行い，平成25年3月までに実験データ分析，候補microRNAの抽出を行う予定であった．しかしながら，研究の目的に合致するドナーが例年より少なく臨床検体の収集に予想以上の時間を要した．
また，平成25年3月までmicroRNAの感染実験で用いるレポーター細胞を樹立する予定であったが，レポーター細胞の樹立は困難であった．

Strategy for Future Research Activity

micoRNAの発現実験のデータ分析，候補microRNAの抽出は，平成25年4-6月で行う予定である．
レポーター細胞の樹立ができなかったため，microRNA感染による表現型の解析にはII型肺胞上皮細胞マーカーであるpro surfactant protein-Cを用いた免疫蛍光染色を用い，ArrayScanにて発現量を定量することに変更した．