2013 Fiscal Year Annual Research Report
ｐ３００／ＧＡＴＡ４のプロテオミクス解析による新規心筋細胞肥大反応制御因子の探索
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24890191
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| Research Institution | University of Shizuoka |
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Principal Investigator |
砂川 陽一 静岡県立大学, 薬学部, その他 (30466297)
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| Project Period (FY) |
2012-08-31 – 2014-03-31
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| Keywords | 心肥大 / 転写因子 / GATA4 / p300 / 翻訳後修飾 |
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| Research Abstract |
高血圧、心筋梗塞などを起因として分泌される液性因子は心筋細胞膜状のレセプターを活性化し、心筋細胞肥大を誘導する。その過程において様々な細胞内シグナル伝達系が活性化し、そのシグナルは最終的には心筋細胞核に到達、HAT活性を有するp300を活性化し、転写因子GATA4のアセチル化を誘導することで肥大反応因子の転写を亢進する。この心筋細胞核内のp300/GATA4複合体による活性制御機構を解明するために、p300/GATA4結合因子であるRbAp48/46及びその構成因子であるHDAC1/2について解析を行った。
1)免疫沈降-WB及びリコンビナントタンパクを用いたGSTプルダウンの結果、GATA4はRbAp48/46と直接結合するがHDAC1/2とは直接結合しないことが判明した。またRbAp48/46はHDAC1/2と強固に結合していることを見出した。HEK293T細胞にてRbAp48/46をノックダウンしたところ、GATA4とHDAC1/2との結合が減少、p300/GATA4複合体の増加及びGATA4のアセチル化の亢進がみられることが判明した。2)HDAC1/2のノックダウンはフェニレフリン刺激による心筋細胞肥大を増悪させ、RbAp48/46の過剰発現による肥大抑制が見られなかった。またクラスIHDAC阻害剤であるバルプロ酸を用いて検討したところ、同様の結果が得られた。3)心筋細胞へのフェニレフリン刺激はGATA4のリン酸化を誘導するが、それとともにGATA4-RbAp48/46複合体が解離し、GATA4のアセチル化が亢進した。この反応はMEK/ERK阻害剤であるPD98059により抑制された。p300HAT阻害剤ではGATA4のリン酸化は抑制せず、PD98059ではGATA4のアセチル化の阻害が見られた。
以上の結果から、RbAp48/46はHDAC1/2とともに転写抑制複合体を形成し、GATA4の転写活性を抑制していることが判明した。この複合体の制御にはGATA4のリン酸化がキーであることが示唆された。
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| Current Status of Research Progress |
Reason
25年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
25年度が最終年度であるため、記入しない。
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