2017 Fiscal Year Annual Research Report
Sorting mechanism for RNA plymerase II transcripts
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25251004
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| Research Institution | Kyoto University |
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Principal Investigator |
大野 睦人 京都大学, ウイルス・再生医科学研究所, 教授 (80201979)
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| Project Period (FY) |
2013-10-21 – 2018-03-31
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| Keywords | RNAポリメラーゼⅡ / RNA核外輸送 / mRNA / U snRNA / hnRNP |
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| Outline of Annual Research Achievements |
１．hnRNP Cの４量体が200-300塩基長を認識する様式を構造生物学的手法で明らかにする。hnRNP CのどのドメインがRNAの長さを認識しているのかの情報がタンパク質の結晶化を高効率化するためには重要である。hnRNP CはRNA結合を担うRRMとBASICの2つのドメインと、多量体形成に必要なZIPPERやACIDICドメインを持つ。H29年度には、hnRNP Cの変異体解析により、RNA分類にはBASICドメインとZIPPERドメインが必要であることがわかった。BASICドメインは阻害活性におけるhnRNP CのRNA結合に大きく寄与し、ZIPPERドメインはRNA結合活性を強化する。また、ZIPPERドメインはRNAの長さの分類に寄与することが示唆された。
２．４量体の核内での解離・置換のダイナミックなメカニズムを明らかにする。HeLa細胞核抽出液中に、４量体をRNAから解離させるATP加水分解依存的な活性が存在することが分かっている。責任因子の生化学的精製・同定のためには試験管内の系を高効率化することが必須である。H29年度には様々な系を試したが、十分な高効率化を実現するには至らなかった。
３．４量体をノックダウンした細胞中では、U snRNA輸送因子が結合してしまったような異常mRNAの核外輸送が停止されることが分かっている。このようなmRNA複合体の異常を感知して発現を止める新規核内mRNA監視機構を明らかにする。H29年度はPHAXのKDの表現型を中心に解析した。U snRNAの核外輸送因子という特殊な機能を持つと思われていたPHAXの発現低下が、ゲノムの不安定化を引き起こすことが明らかになった。この原因として、DNA損傷応答に重要なヒストンH2AXの発現が低下していることが分かり、PHAXのH2AXの発現における重要性が明らかになった。
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| Research Progress Status |
29年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
29年度が最終年度であるため、記入しない。
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