2014 Fiscal Year Annual Research Report
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25252011
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| Research Institution | Okayama University |
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Principal Investigator |
鈴木 信弘 岡山大学, その他部局等, 教授 (70206514)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
中屋敷 均 神戸大学, (連合)農学研究科(研究院), 教授 (50252804)
近藤 秀樹 岡山大学, その他部局等, 准教授 (40263628)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | RNA サイレンシング / 菌類ウイルス / マイコウイルス / 宿主免疫 / クリ胴枯病菌 / イネいもち病菌 / 白紋羽病菌 / マイコイミュニティ |
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| Outline of Annual Research Achievements |
大課題A,B,Cのうち、A.「宿主菌によるウイルス(分子パターン)認識、防御機構および宿主ウイル ス防御への反撃機構の解明」、B. 「DNAを介したウイルス防御反応の解明」を遂行する。A2, A5, B4は昨年度に引き続き進めた。
A2 子のう菌RNAiにおけるウイルス(分子パターン)認識機構の解明は以下のアプローチで進めた。まず、クリ胴枯病菌 ku70/80 破壊系統(任意の遺伝子 の破壊株作成効率が極めて高い)で各種の宿主ヘリカーゼ遺伝子（dsRNAセンサーとして想定）の破壊株を作成し、それらにdcl2転写開始500b上流配列を用いたレポーターコンストラクトを形質転換し、得られる株のウイルス感染応答性を調べた。これまで、レポーター系を構築し、ジェネティックスクリーンを進めている。
A5 自然免疫としてのRNAiのマイコウイルス感染における意義の解明に向けて取り組んだ。RNAi欠損株と野生型菌にRosellinia necatrix victorivirus 1, Rosellinia necatrix megabirnavirus 1を導入し、それらの挙動を両株間で比較した。RnVV1については、他のウイルスあるいはdsRNAで発現誘導されるdcl2により著しく複製が阻害されることが明らかとなった。
B4 DNAウイルスと宿主RNAiを介したせめぎ合い 最近、植物(ジェミニウイルス)、動物DNAウイルス(サーコウイルス)に類似したssDNAウイルス(CasCV, SsHA DV-1)が菌類から見つかった。昨年度に続き、SsHADV1がクリ胴枯病菌で複製可能かどうかさらに検討したが、結果は陰性であった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
実験は予定通り遂行した。A2では、ウイルス感染応答に関与する宿主因子探索系を確立し、スクリーニングを進めている。A5では、RnPV2に対する宿主免疫に対し、dcl2がagl2よりも大きな貢献することを明らかにした。B4については、感染性のジェミニ様DNAウイルス（SsHADV1）が現在まで得られていない。現在のところ、いろんな原因が考えられるが、クリ胴枯病菌を宿主としない可能性が高い。従って、「DNA ウイルスが RNAi の標的となっているかを転写後レベル、転写レベル(ゲノム DNA のメチル化あるいは ヘテロクロマチン化を介した)で調べる」は実施していない。次年度はメタウイルスを用いて類似研究を進める。
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| Strategy for Future Research Activity |
来年度も、大課題A,B,Cのうち、A.「宿主菌によるウイルス(分子パターン)認識、防御機構および宿主ウイル ス防御への反撃機構の解明」、B. 「DNAを介したウイルス防御反応の解明」を遂行する。A2, A3, B4は昨年度引き続き進める。
A2 子のう菌RNAiにおけるウイルス(分子パターン)認識機構の解明は以下のアプローチで進める。まず、クリ胴枯病菌 ku70/80 破壊系統(任意の遺伝子 の破壊株作成効率が極めて高い)で各種の宿主ヘリカーゼ遺伝子（dsRNAセンサーとして想定）の破壊株を作成し、それらにdcl2転写開始500b上流配列を用いたレポーターコンストラクトを形質転換する。得られる株のウイルス感染応答性を調べる。
A5 自然免疫としてのRNAiのマイコウイルス感染における意義の解明に向けて取り組む。RNAi欠損株と野生型菌にRosellinia necatrix victorivirus 1, Rosellinia necatrix partitivirus 2を導入し、それらの挙動を両株間で比較する。
A6 RNAiシグナルは菌細胞間移行するか？では、植物由来のrdr(RDRP6)による相補試験を実施する。A7 染色体内在化ウイルスDNA(元々はRNAまたはDNAウイルス)の防御反応での機能では、予め染色体に組み込まれた配列が、ウイルス感染以前に2本鎖RNAの供給源になっている可能性を探る。
B4 DNAウイルスと宿主RNAiを介したせめぎ合いでは、感染性のジェミニ様DNAウイルス（SsHADV1）が現在まで得られなかった。今年度は、いもち病菌MAGGY(メタウイルス科に属するレトロトランスポゾン)を用い、RNAiとのせめぎ合いを解析する。
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[Journal Article] The chestnut blight fungus for studies on virus/host and virus/virus interactions: from a natural to a model host.2014
Author(s)
Eusebio-Cope, A., Sun, L., Tanaka, T., Chiba, C., Kasahara, S., and Suzuki, N.
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Journal Title
Virology
Volume: 477
Pages: 164-175
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Genome rearrangement of a mycovirus Rosellinia necatrix megabirnavirus 1 affecting its ability to attenuate virulence of the host fungus.2014
Author(s)
Kanematsu, S., Shimizu, T., Salaipeth, L., Yaegashi, H., Sasaki, A., Ito, T. and Suzuki N.
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Journal Title
Virology
Volume: 451
Pages: 308-315
DOI
Peer Reviewed
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[Presentation] The first evidence for internal ribosomal entry sites in mycovirus genomes.2014
Author(s)
Chiba, S. Jamal, A., Tanaka, T., Kondo, H. and Suzuki, N.
Organizer
Third International Mycovirus Symposium,
Place of Presentation
UVM, Burlington, USA.
Year and Date
2014-08-02 – 2014-08-05
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[Presentation] Transfection of the megabirnavirus RnMBV1 into a model filamentous fungus, Cryphonectria parasitica: biological significance and expression strategies.2014
Author(s)
Salaipeth, L., Chiba, S., Eusebio-Cope, A., Kanematsu, S., Suzuki, N.
Organizer
16th International Congress of Virology
Place of Presentation
Montreal, Canada.
Year and Date
2014-07-27 – 2014-08-01
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