2013 Fiscal Year Annual Research Report
アンドロゲン／抗アンドロゲン様化学物質の胎生期・発達期曝露影響に関する総合研究
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25281026
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Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
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| Research Institution | Gifu Pharmaceutical University |
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Principal Investigator |
中西 剛 岐阜薬科大学, 薬学部, 准教授 (50303988)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
永瀬 久光 岐阜薬科大学, 薬学部, 教授 (40141395)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | アンドロゲン / 性分化 / 17β-ヒドロキシステロイド脱水素酵素 / 胎生期・発達期影響 / トランスジェニックマウス |
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| Research Abstract |
本研究では、申請者らが作製したアンドロゲン過剰暴露モデルマウス（17β3Eマウス：Creリコンビナーゼ（Cre）存在下で、アンドロステンジオンを活性型のテストステロンに変換する17β-ヒドロキシステロイド脱水素酵素３型とEGFPの融合蛋白質（17β3E）を過剰発現するトランスジェニック（TG）マウス）やアンドロゲン応答レポーターTGマウス（A-Repマウス：アンドロゲンに応答してv5タグ付ウミシイタケルシフェラーゼを発現するレポーターマウス）を用いて、性分化におけるアンドロゲンシグナル（Aシグナル）の生理学的意義を解明するとともに、アンドロゲン作動性化学物質の胎生期・発達期暴露における生殖発生毒性発現機構の解明とリスクアセスメントへのフィードバックを行うことを最終目標としている。本年度は胎生期の生殖器官形成への影響を中心に検討を行った。肛門生殖突起間距離（AGD）の経時的な測定を行ったところ、野生型の胎仔においては胎齢15.5日から雄で有意な伸長が見られ、明確な性差が確認できた。またアンドロゲン高産生の雌性胎仔においても、胎齢15.5日から野生型雌胎仔と比べて有意なAGDの伸長が見られ、妊娠期間中は野型の雄性胎仔とほぼ同等の長さであった。さらに野生型雌性胎仔においては胎齢18.5日でほぼ完全に消失するはずのウォルフ管が、アンドロゲン高産生の雌性胎仔では残存しており、包皮の形成も雄型になっていた。一方で、アンドロゲン高産生の雄性胎仔は野生型雄胎仔と比べて、特に変化は認められなかった。これらの結果は、アンドロゲンは胎生期から内生殖器の一部と外生殖器を雄性化することを示唆していると考えられた。またA-Repマウスを用いた検討でも、Aシグナルが検出できるラインが存在することを確認した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
当初は出生後の影響についても検討を行う予定であったが、今年度は胎生期の生殖器形成に焦点を絞って検討を行った。その結果、次年度以降に検討する予定であった包皮形成などについても新たな知見を得ることができた。またホルモン濃度などについても詳細な検討を行うことができ、本研究で用いているアンドロゲン高産生マウスは、少なくとも胎生期においては、アンドロゲンのみが高産生になっていることも明らかにできた。さらにA-Repマウスの選別も行い、Aシグナルを検出できるラインが存在することも確認できていることから、概ね計画通り進行していると考えている。
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| Strategy for Future Research Activity |
次年度以降も、アンドロゲン高産生胎仔や仔マウスの生殖器官形成について、引き続き検討を行っていくとともに、抗アンドロゲン剤であるフルタミドを胎生期に投与して、これまで確認されてきたフェノタイプが消失するかについても検証を行うことで、アンドロゲンに依存した作用点を明確にしていきたいと考えている。A-Repマウスの選別も引き続き行っていくが、問題は全身でアンドロゲン作用を検出できるラインを得ることができるかがカギとなる。現状では雄性生殖器の一部でしか検出できていない。またウミシイタケルシフェラーゼの基質であるセレンテラジンがin vivoイメージングには向かないため、現在は検出ごとにマウスから臓器を回収して反応性を検討している。今後はin vivoイメージングに適した溶媒条件などを検討して、検出のスループット性を高めることで、ラインの選別を迅速に行う予定である。
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| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
今年度はA-Repマウスの選別をin vivoイメージング等により行うために、セレンテラジン等の試薬代にかなりの費用を充てる予定であったが、それが思うように進まず、経費が残ってしまう結果となった。またA-Repマウス繁殖も予想よりも進んでおらず、動物飼育維持費が節約できたのも一因であると考えられる。
現在、やや律速となっているA-Repマウスの繁殖を進め、円滑に実験できるように最善を尽くすとともに、ラインの選別を急ぐために繰り越した経費を充てる予定である。
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