2014 Fiscal Year Annual Research Report
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25282241
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| Research Institution | Tokyo Medical and Dental University |
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Principal Investigator |
渡瀬 啓 東京医科歯科大学, 脳統合機能研究センター, 准教授 (30376800)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
水澤 英洋 独立行政法人 国立精神・神経医療研究センター, その他部局等, 病院長 (30144091)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | 脊髄小脳変性症 / リソソーム / 神経炎症 / ノックインマウス |
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| Outline of Annual Research Achievements |
1)小脳プルキンエ細胞特異的なリソソーム生合成系路の活性化によりSCA６の病態が改善できるかどうか検討するため、テトラサイクリン依存的にリソソーム生合成のマスター転写因子TFEBをプルキンエ細胞特異的に過剰発現するPcp2-tTA/TRE-3xFLAG-hTFEBトランスジェニックマウスの作製を行なった。また並行してCRISPR/Cas9法を利用して恒常的活性化変異をTfeb遺伝子に有するmTfebS269Aノックインマウスの作製をを行ない、いずれも目的のマウスの作製に成功した。今後これらのマウスとSca6 MPI-118Qノックインマウスとの交配により多重変異マウスを作成し、その効果を検討する。
2)小脳の神経炎症の修飾によりSCA6病態を改善しうるかどうか検討する目的で、ミクログリアの活性化に関与するToll-like-receptor (TLR)のシグナル伝達に必要なアダプター分子MyD88のノックアウトマウスとSca6 MPI-118Qマウスとの２重変異マウスを作製し、その解析を行なった。生後７週齢２重変異マウスではコントロールマウスと比較してミクログリアの極性が好炎症性のM1タイプから神経保護的なM2タイプにシフトしており、協調運動障害・プルキンエ細胞変性が有意に改善していた。一方SCA6患者小脳においても病理解析の結果TLRを発現するミクログリアが活性化していることが確認できた。従って自然免疫系の活性化を修飾することでがSCA6病態の進行を遅延させうる可能性が考えられた。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
当初CAG-floxStop TFEB マウスをイタリアの研究者から導入することを予定していたが、先方の都合で導入することができず、代わりに自らテトラサイクリン依存性にTFEBを過剰発現するマウスや恒常的活性化型Tfebを発現するノックインマウスを作製したため、当初の予定よりはやや進捗は遅れている。
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| Strategy for Future Research Activity |
i) TRE-3xFLAG-hTFEBマウスとPcp2-tTAマウスの交配によりプルキンエ細胞特異的にリソソーム生合成系路のマスター転写因子TFEBを過剰に発現するマウス及びmTfebS269Aノックインマウスの作製を終え、現在これら変異マウスとMPI-118Qマウスを交配して２重変異マウスを作製しているところである。今後は得られたマウスの解析を行ない、病態が改善するかどうかを検討し、改善が確認できればその分子機構の解明を行なう。
ii) ７週齢MyD88 KO/ MPI-118Qマウスで協調運動障害・プルキンエ細胞変性の改善が認められたが、今後この改善効果が老齢の２重変異マウスでも認められるかどうか検討する。さらに近年、主に癌や自己免疫疾患を対象にTLRシグナル伝達系を修飾する小分子化合物の開発がすすめられており、それらをSca6 MPI-118Qノックインマウスに投与することによっても病態を改善しうるかどうかの検討を開始する。
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| Causes of Carryover |
初年度に当初予定していたイタリアの研究者からのCAG-floxStop TFEB マウスの導入ができなかったため、研究計画にやや遅れが生じたこと及び研究補助員の雇用に関して当初予定していた時期には適当な人材を得ることができず、やや雇用の開始が遅れたことが主な原因である。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
今年度CAG-floxStop TFEB マウスに替わるものとして、小脳プルキンエ細胞特異的にTfebを過剰発現するPcp2-tTA/TRE-3xFLAG- hTfebトランスジェニックマウス及び恒常的活性化型Tfebを発現するmTfebS269Aノックインマウスの作製に成功した。これらのマウスの維持繁殖・Sca6 KIマウスとの多重変異マウス作製等にかかる費用及び実際にこれらマウスの解析にかかる費用のほぼすべては次年度以降の費用で賄う計画である。
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Research Products
(3 results)
