2015 Fiscal Year Annual Research Report
PPRコードを利用した細胞質雄性不稔の稔性回復因子の同定と創成
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25292219
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| Research Institution | Kyushu University |
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Principal Investigator |
中村 崇裕 九州大学, (連合)農学研究科(研究院), 准教授 (10464398)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | 細胞質雄性不稔 / ゲノム編集 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
(1) Rfとして働く天然型PPR蛋白質の予測と同定
(a) 様々なアミノ酸多型を持つRf様遺伝子の機能検定 H27年度は、これまでのオグラ型細胞質ダイコンRf遺伝子の機能性の予測値と実測値についての解析を行った。予測プログラムへの反映を行った。
(b) 未同定Rf遺伝子の同定 遺伝学的に優性のRf遺伝子として働くことが明らかになったPPR遺伝子について、ミトコンドリアorf352遺伝子mRNAとの結合を生化学的に検証した。具体的には、当該PPRの組換えタンパク質をコムギ胚芽無細胞系により調製し、ゲルシフト法、アルファスクリーン方などの生化学的な手法で、orf352遺伝子ｍRNAとの結合を検証した。
(2) PPR蛋白質の改変によるカスタムRfの創出
BT型細胞質不稔イネのCMS遺伝子であるorf79に特異的に作用し、編集（C→Uへの変換）することで、タンパク質コード領域に新たな翻訳終止コドンを形成し、CMS遺伝子の発現を阻害する分子ツールの開発を行った。動物培養細胞で当該分子ツールの検証を行った。具体的には複数個のPPRモチーフを人工的に連結することで、目的とするカスタムPPR分子を設計し、全遺伝子合成により目的DNA断片を得た。設計したPPR分子の配列特異的なRNA結合能を動物培養細胞で検証した。目的とする性質が検証できたPPR分子にRNA編集を補助するエフェクタードメインを連結し、解析に用いた。
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| Research Progress Status |
27年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
27年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Causes of Carryover |
27年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
27年度が最終年度であるため、記入しない。
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[Journal Article] Homologous recombination-independent large gene cassette knock-in in CHO cells using TALEN and MMEJ-directed donor plasmids.2015
Author(s)
Sakuma, T., Takenaga, M., Kawabe, Y., Nakamura, T., Kamihira, M. & Yamamoto, T.
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Journal Title
Int. J. Mol. Sci.
Volume: 16
Pages: 23849-23866
DOI
Peer Reviewed / Open Access
