2015 Fiscal Year Annual Research Report
新しいGタンパク質共役受容体シグナル制御機構の解析
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25293013
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| Research Institution | Nara Institute of Science and Technology |
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Principal Investigator |
伊東 広 奈良先端科学技術大学院大学, バイオサイエンス研究科, 教授 (10183005)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
小林 哲夫 奈良先端科学技術大学院大学, バイオサイエンス研究科, 助教 (80433994)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | Gタンパク質 / シグナル伝達 / 制御分子 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
Gタンパク質共役受容体（G protein-coupled receptor; GPCR）は神経系、循環器系、内分泌系、生体防御系など様々な生体システムや個体の形成過程で大事な働きをしている。GPCRはおよそ1000種類存在するが、その中でもAdhesion GPCRというヒトにおいて33種類存在する新たなGPCRメンバー、そしてGPCRとは別にGタンパク質を制御する分子に関する研究を進め、以下の研究成果を挙げた。 (1) adhesion GPCRに属するGPR56に対するモノクローナル抗体を調製した。得られた抗体の中からGPR56を介するシグナルを促進あるいは抑制する作用を指標にして、ヒトグリア腫細胞の遊走を阻害する抗体、さらにヒト急性白血病細胞の遊走と増殖を阻害する新たな抗体を得ることが出来た。 (2)マウスの腹部にハイブリドーマを移植し、その後マウスの腹水を採取することで、多くのハイブリドーマから数ミリグラム単位の抗体が得られることが出来た。(3)これら機能性抗体の重鎖と軽鎖の可変領域をコードするcDNAを単離し、発現ベクターに組込み、HEK293細胞へ導入し、組換え抗体が出来るかどうかの確認を行った結果、いくつかの組換え抗体の発現が出来たことから、今後、ハイブリドーマの不安定性などの問題を克服する糸口が得られた。(4)ヒト乳がん細胞の特殊なゲルを用いた３次元培養により浸潤様構造を示す条件を見出し、その浸潤様構造形成に関与すると思われるいくつかのadhesion GPCRをsiRNAの効果から同定した。(4)機能性抗体がこの浸潤様構造の形成に影響を与えることを見出した。(5) Latrophilin1の細胞外ドメインとGPR56の膜貫通ドメインがGABA作動性神経細胞に共発現していることを抗体を用いて確認し、両者からなるキメラ複合体の存在を示唆する結果を得た。 (3)Gタンパク質のユビキチン化やパルミトイル化を制御する分子を同定し、その翻訳後修飾の分子機構の解明に向け大きく前進することが出来た。
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| Research Progress Status |
27年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
27年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Causes of Carryover |
27年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
27年度が最終年度であるため、記入しない。
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[Presentation] Gαsユビキチン修飾を制御する分子機構の解析2015
Author(s)
鯉森貴行, 西村基喜, 竹田浩之, 多胡憲治, 小林 哲夫, 澤崎達也, 伊東 広
Organizer
第38回日本分子生物学会年会・第88回日本生化学大会
Place of Presentation
神戸ポートアイランド（兵庫県神戸市）
Year and Date
2015-12-01 – 2015-12-04
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[Presentation] Analysis of melecular mechanisms for Gαs ubiquitination2015
Author(s)
Koimori T, Nishimura M, Takeda H, Tago K, Kobayashi T, Sawazaki T, Itoh H
Organizer
Pontianak International Conference on Advanced Pharmaceutical Sciences (PICAPS) 2015 and the 6th Annual Symposium of Indonesian Society for Cancer Chemoprevention
Place of Presentation
Pontianak, Indonesia
Year and Date
2015-09-14 – 2015-09-15
Int'l Joint Research
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