2016 Fiscal Year Annual Research Report
Development of anti-miRNA oligonucleotides with stable duplexes to control cardiac diseases.
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25293030
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| Research Institution | National Institute of Advanced Industrial Science and Technology |
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Principal Investigator |
小松 康雄 国立研究開発法人産業技術総合研究所, 生物プロセス研究部門, 研究グループ長 (30271670)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
南川 典昭 徳島大学, 大学院医歯薬学研究部, 教授 (40209820)
平野 悠 国立研究開発法人産業技術総合研究所, 生物プロセス研究部門, 主任研究員 (70415735)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | microRNA / アンチセンス / オリゴヌクレオチド / 核酸医薬 / RNA / クロスリンク |
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| Outline of Annual Research Achievements |
１）クロスリンク（CL）2本鎖構造を有するDNAおよび2’-O-methyl RNA（MeRNA）の隣接ハイブリの安定化効果の詳細な解析
昨年度までに、DNAおよびMeRNAのCL2本鎖が、隣接する1本鎖上におけるRNAとのハイブリを高度に安定化することを明らかにした。H28年度では、CL2本鎖を有する1本鎖プローブと標的RNAとのハイブリの融解温度から熱力学的パラメータを算出し、安定化効果を詳細に解析した。実験の結果、CL2本鎖は隣接1本鎖におけるハイブリにおいてエントロピーの低下を抑制する効果を有し、それによってハイブリを安定化していることを明らかにした。
２）CL2本鎖含有anti-microRNA oligonucleotide (AMO)の、microRNA (miRNA)の抑制活性の評価
昨年度までに、miRNAとの相補的配列の両末端にCL2本鎖構造を導入したAMOが、miRNAの作用を効果的に抑制すること、ならびにその5’および3’末端それぞれに導入されたCL2本鎖の、miRNA抑制活性における役割が異なることを見出した。これらの結果はいずれも、miR-21に対する効果で評価していたため、H28年度においてはmiR-21以外のmiRNAに対するAMOの効果を調べた。miRNAとしてmiR-16およびlet-7cを選択し、それぞれに対するCL2本鎖含有AMOを複数種類合成し、HCT116ならびにHeLa細胞を用いて各AMOの阻害効果を調べた。実験の結果、それぞれのmiRNA阻害においても、CL2本鎖の有効性は同様に観察され、CL2本鎖は他のmiRNAの阻害にも有効な構造であることを確認した。これらの結果より我々は、CL2本鎖が核酸分解酵素に対する耐性の向上と、ArgonauteのN-domain側との相互作用を介することでmiRNAに対する高い親和性を発現する分子機構を提案するに至った。
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| Research Progress Status |
28年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
28年度が最終年度であるため、記入しない。
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