2014 Fiscal Year Annual Research Report
合理的プロドラッグ創製を可能にするヒトCESインビトロ・インビボ試験系の構築
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25293035
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| Research Institution | Chiba University |
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Principal Investigator |
千葉 寛 千葉大学, 薬学研究科(研究院), 教授 (40159033)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
小林 カオル 千葉大学, 薬学研究科(研究院), 准教授 (30255864)
今井 輝子 熊本大学, 薬学部, 教授 (70176478)
細川 正清 千葉科学大学, 薬学部, 教授 (70181500)
降幡 知巳 千葉大学, 薬学研究科(研究院), 助教 (80401008)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | プロドラッグ / CES / ヒト予測 / 評価系 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究では、エステル型プロドラッグの開発に有用なin vivoおよびin vitroヒトCESモデルの開発を目的としている。本年度では、CES1A1遺伝子標的zinc finger nuclease（CES1-ZFN）を用い、代表的な小腸モデルであるCaco2細胞のCES遺伝子のゲノム編集に取り組んだ。
まず、遺伝子導入効率・相同組み換え効率の高いヒト肝がんFLC7細胞を用い、CES1-ZFNの効果検証をおこなった。その結果、一般的なリポフェクション方法ではCES1-ZFNの効果発現に至らなかったものの、その方法最適化をおこなうことにより、FLC7細胞のCES1A1遺伝子を破壊することが可能であることを明らかとした。そこで、同様の手法を用いてCaco2細胞へのCES1-ZFN導入を進めた。これまでにFLC7細胞で用いたリポフェクション条件、およびCaco2細胞に最適とされるリポフェクション条件・試薬、セルソーティングによる導入細胞分取等種々の条件をおこなったが、Caco2細胞におけるCES1A1遺伝子破壊は認められていない。そこで、現在はアデノウイルス・レトロウイルスによるCES1-ZFN導入を進めている段階である。
一方、short-hairpin RNAを用い、CES1A1遺伝子破壊Caco2細胞の擬似細胞としてCES1A1ノックダウンCaco2細胞を構築した。また、モデルプロドラッグとして種々の鎖長を有するアトロバスタチンエステル体ライブラリーを構築した。これらを用いることによりプロドラッグ透過性とCES発現プロファイルの関連解析の予備検討をおこなうことが可能であり、次年度早々に取り掛かる予定としている。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
in vitro系については順調に進んでいるが、in vivo系については十分な成果が上がっているとは言い難い。
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| Strategy for Future Research Activity |
アデノウイルス・レトロウイルスによるCES1-ZFN導入を進めるとともに、種々の鎖長を有するアトロバスタチンエステル体ライブラリーをモデルプロドラッグとして、プロドラッグ透過性とCES発現プロファイルの関連解析をおこなう。in vivo系については実験手法をかえ比較的サイズの小さいCESのKOマウスの作成から進める。
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