2015 Fiscal Year Annual Research Report
マラリア原虫の赤血球侵入時におけるシグナル伝達経路の解明
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25293102
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| Research Institution | Nagasaki University |
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Principal Investigator |
金子 修 長崎大学, 熱帯医学研究所, 教授 (50325370)
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2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | 原虫 / 侵入 / シグナル伝達 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
マラリア原虫の赤血球侵入は宿主体内では必須のステップである。赤血球表面に接着した原虫は、細胞内小器官から種々の分子を秩序だって分泌しながら赤血球に侵入する。ところが、これらの細胞内小器官からの分子分泌に関するシグナル伝達経路は断片的にしかわかっていない。そのため、本研究では、新規コンディショナル・ノックダウン/アウト系により、赤血球侵入期に発現している原虫分子をノックダウン/アウトした組換えネズミマラリア原虫を網羅的に作製し、細胞内小器官からの分子分泌やCa 濃度の変化等を指標に、各細胞内小器官の分泌調節機序のシグナル伝達経路を明らかにすることで、ワクチンや薬剤開発の標的を見出す事を目的とする。
前年度に調整したTet-ONにより標的遺伝子座破壊が誘導されるプラスミドにより、msp8遺伝子座の発現が調整できる組換え原虫を得た。また、Tet-OFFによる遺伝子発現制御が見られたものの効率が悪いため、プラスミドの塩基配列を再確認したところ予想とは異なる配列を見出した。この点を検討する組換え原虫を作製した。赤血球に侵入する能力を保持したP. yoeliiのメロゾイトを精製する方法を確立する過程で15℃でメロゾイトを保持することで、赤血球侵入活性を４時間にわたり精製直後の50％以上の活性で維持できることを見出した。この発見により精製したメロゾイトを長時間にわたり扱うことが可能となった。さらに、Ca2+バイオセンサーYC-Nanoを発現する遺伝子改変マラリア原虫を用いて、細胞内Ca2+濃度を経時的にモニターする検出系も確立した。熱帯熱マラリア原虫の赤血球侵入期における網羅的転写解析により赤血球侵入期に発現する事が分かっている分子のP. yoelii相同体をリスト化し、シグナル伝達に関与すると考えられるキナーゼとフォスファターゼを標的としたノックダウン/アウト用プラスミドの作製を開始した。
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| Research Progress Status |
27年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
27年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Causes of Carryover |
27年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
27年度が最終年度であるため、記入しない。
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