2015 Fiscal Year Annual Research Report
iPS細胞を活用したヒトキメラマウス肝炎発症モデルの開発とその臨床応用
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25293176
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| Research Institution | Nagoya City University |
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Principal Investigator |
田中 靖人 名古屋市立大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (90336694)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
松永 民秀 名古屋市立大学, 薬学研究科(研究院), 教授 (40209581)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | 肝炎ウイルス / HBV / iPS細胞 / キメラマウス |
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| Outline of Annual Research Achievements |
最終目標である免疫細胞を保持するヒト肝細胞キメラマウス作製とB型慢性肝炎モデルを構築するために、HLA既知のiPS細胞から成熟肝細胞に分化させ、TK-NOGマウスへの移植実験を行う施設内の動物実験の許可及び実験環境は整った。
１、ヒトiPS細胞由来肝細胞の成熟化に向けた検討:より成熟したヒトiPS細胞由来肝細胞を作製するため、分化に有用な添加因子の探索を行った結果、複数の因子を見出した。これらを肝細胞への分化誘導時に用いることで、主要な薬物代謝酵素であるCYP3A4などの薬物代謝酵素の発現上昇が認められた。また、リファンピシンを添加することで、プレグナンX受容体（PXR）を介したCYP3A4の発現誘導も認められ、より成熟したヒトiPS細胞由来肝細胞の作製が可能となった。
２、ヒト肝キメラマウス作製に向けた検討:細胞移植に有用と考えられるスフェロイドを形成させる3次元培養により肝細胞へ分化誘導を行った。また、100%異種動物肝臓をもつキメラマウス作製のため、現在ラットES細胞をマウス受精卵に移植する方法を行っている。受精卵が8細胞まで分裂した段階において、ラットES細胞を受精卵に直接導入する方法（injection法）ならびに受精卵の透明帯を破壊した後、ラットES細胞を付着させる方法（aggregation法）の2通りでキメラマウスの作製を試みている。これまでに、マウス肝臓の約30％程度までラット肝臓に置換することが可能となった。
３、キメラマウスの作製:ヒトiPS細胞から肝細胞に分化誘導22日後に細胞を剥離し、スフェロイド形成し、その後浮遊培養した。移植用のマウスは免疫不全のTK-NOGマウスにガンシクロビルを投与し、肝障害が確認されたのちに、分化した肝細胞を門脈経由で移植した。現在、飼育中であり近日中に置換率を解析するために採血を行い、ヒトアルブミンを解析予定である。
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| Research Progress Status |
27年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
27年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Causes of Carryover |
27年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
27年度が最終年度であるため、記入しない。
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Research Products
(12 results)
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[Journal Article] Virological characteristics of hepatitis B genotype G/A2 recombination virus in Japan.2016
Author(s)
Tsuzuki Y, Watanabe T, Iio E, Fujisaki S, Ibe S, Kani S, Hamada-Tsutsumi S, Yokomaku Y, Iwatani Y, Sugiura W, Okuse C, Okumura A, Sato Y, Tanaka Y.
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Journal Title
Hepatol Res.
Volume: 印刷中
Pages: 印刷中
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Hepatitis B surface gene variants isolated from blood donors with overt and occult HBV infection in north eastern Egypt.2015
Author(s)
Kishk R, Nemr N, Elkady A, Mandour M, Aboelmagd M, Ramsis N, Hassan M, Soliman N, Iijima S, Murakami S, Tanaka Y, Ragheb M.
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Journal Title
Virol J.
Volume: 12
Pages: －
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
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[Presentation] Novel 4'-modified nucleoside analogs exert antiviral replication against hepatitis B virus with drug resistance mutations2016
Author(s)
Hayashi S, Takamatsu Y, Maeda K, Murakami S, Omagari K, Matsui T, Isogawa M, Watanabe T, Karino Y, Kohgo S, Mitsuya H, Tanaka Y.
Organizer
25th Conference of the Asian Pasific Association for the Study of the Liver
Place of Presentation
新高輪 国際館パミール(東京都・港区）
Year and Date
2016-02-20 – 2016-02-24
Int'l Joint Research
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[Presentation] A novel entecavir resistance mutation rtA186T causes viral breakthrough in chronic hepatitis B patients2015
Author(s)
Hayashi S, Murakami S, Omagari K, Matsui T, Iio E, Isogawa M, Watanabe T, Karino Y, Takamatsu Y, Kohgo S, Maeda K, Mitsuya H, Tanaka Y.
Organizer
The 66th Annual Meeting of the American Association for the Study of Liver Diseases
Place of Presentation
サンフランシスコ（アメリカ）
Year and Date
2015-11-13 – 2015-11-17
Int'l Joint Research
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[Presentation] 新規エンテカビル耐性株の同定とその特徴2015
Author(s)
林佐奈衣, 村上周子, 尾曲克己, 松居剛志, 飯尾悦子, 五十川正記, 渡邊綱正, 狩野吉康, 田中靖人
Organizer
第51回日本肝臓学会総会
Place of Presentation
ホテル日航熊本(熊本県・熊本市）
Year and Date
2015-05-21 – 2015-05-22
