2014 Fiscal Year Annual Research Report
動脈壁と周囲脂肪組織における慢性炎症の可視化と病態解明
Project/Area Number |
25293184
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Research Institution | The University of Tokushima |
Principal Investigator |
佐田 政隆 徳島大学, ヘルスバイオサイエンス研究部, 教授 (80345214)
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Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
東邦 康智 東京大学, 医学部附属病院, 助教 (10586481)
福田 大受 徳島大学, ヘルスバイオサイエンス研究部, 特任講師 (40637568)
堀川 一樹 徳島大学, ヘルスバイオサイエンス研究部, 教授 (70420247)
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Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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Keywords | 慢性炎症 / 動脈硬化 / 生活習慣病 / インフラマソーム / カスパーゼ / サイトカイン / 可視化 / 血管周囲脂肪 |
Outline of Annual Research Achievements |
慢性炎症の起点となるインフラマソームの活性化をCaspase1活性 で評価する系の確立を目指している。青色蛍光タンパクCFPと黄色蛍光タンパクYFP をCaspase1の認識配列であるYEVDGW というアミノ酸配列を含んだリンカーによって結合したFRETコンストラクトを作成し、大腸菌に発現させた遺伝子組み換えタンパクを用いて、in vitro の実験を繰り返した。YEVDGW配列を三個含むコンストラクトが感度が最も良かったが、特異度に問題があった。そこで、リンカーをYVADGPに変更したところ、Caspase1のみで切断されることを確認した。次に、このコンストラクトSCATva 1.43を発現するStable cell line をRAW264.7,THP-1, J774.1 で得た。PMA,LPS, Nigericinで刺激するとIL-1βは培地中に大量に分泌されたが、コンストラクトタンパクは切断されていないことが判明した。そこで、方針を一大転換して、proIL-1βをセンサーにして、切断をうけると蛍光物質cp173Venusが核に移行するようなコンストラクトを作製した。しかし、このコントラストを強制発現させるだけで、無刺激下においても細胞毒性があることが判明した。そのため、pro-IL1βの生理活性を欠損させて、インフラマソーム結合能だけあるコンストラクトを各種作製したところ、N27-N116までに毒性部位があることが判明した。そこで、この毒性部位を欠如したコンストラクトを作製したが、毒性部分にCaspase1によって切断される部位があるため、このコンストラクトではセンサーに使用できないことが判明した。そこで、doxycyclineにより発現を誘導することが可能なpTetOne Vectorにコンストラクトをサブクローニングして、RAW264.7細胞にトランスフェクションして、stable cell line を樹立している。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
コンストラクトの作製ならびに細胞にトランスフェクションしての感度、特異度に関する検討は順調にいった。各種予備実験ののち、十分な特異度を得るため、proIL-1βをセンサーにすることにしたが、このコントラストは強制発現させるだけで、無刺激下においても細胞毒性があることが判明した。そのため、pro-IL1βの生理活性を欠損させて、インフラマソーム結合能だけあるコンストラクトを各種作製したところ、N27-N116までに毒性部位があることが判明した。切断部位はN27とN116であるため、毒性を欠如したコンストラクトでは、pro-IL1βをセンサーに使用できないことが判明した。そこで、doxycyclineにより発現を誘導することが可能なpTetOne Vectorにコンストラクトをサブクローニングして、実験繰り返している。
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Strategy for Future Research Activity |
1)pTetOne-NLS-iSCAT1.7-2NESがdoxycycline で発現を誘導されたのち、炎症活性化刺激で切断され、蛍光物質が核内に移行することを確認する。線状となった発現コンストラクトをFVBマウスの受精卵にマイクロインジェクションし、トランスジェニックマウスの系統を確立し、ホモ化する。 2)pTetOne-NLS-iSCAT1.7-2NESトランスジェニックマウスを、動脈硬化モデルであるApoE欠損マウスや、肥満糖尿病モデルである ob/obマウスと交配して、動脈硬化、肥満糖尿病の病態における、血管壁、脂肪組織での慢性炎症の状態を可視化する。 3)トランスジェニックマウス作製が当初の予定どおり進んでいないため、他の方法を用いて慢性炎症の活性化機構を探索する。生活習慣病によって細胞死を誘導された、血管内皮細胞、平滑筋細胞ならびに脂肪細胞から放出され、慢性炎症の原因となる物質を同定し解析する。Cell free DNAを中心として、その他の核酸、脂質、糖、尿酸など死細胞から放出される物質が慢性炎症を誘導する機序を細胞ならびにマウスを用いて検討する。また、ヒト動脈硬化病変や脂肪組織を解析し、細胞死と慢性炎症との関連を検討する。死細胞から放出される分子や代謝産物の慢性炎症活性化機構を遺伝子改変マウスを用いて検討する。
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Research Products
(165 results)
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[Journal Article] Effects of telmisartan on inflammatory cytokines and the coronary plaque component as assessed on integrated backscatter intravascular ultrasound in hypertensive patients.2014
Author(s)
Yamaguchi K, Wakatsuki T, Soeki T, Niki T, Taketani Y, Oeduka H, Kusunose K, Ise T, Iwase T, Yamada H, Sata M.
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Journal Title
Circ J.
Volume: 78
Pages: 240-247
DOI
Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
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[Journal Article] Endothelial PGC-1α mediates vascular dysfunction in diabetes.2014
Author(s)
Sawada N, Jiang A, Takizawa F, Safdar A, Manika A, Tesmenitsky Y, Kang KT, Bischoff J, Kalwa H, Sartoretto JL, Kamei Y, Benjamin LE, Watada H, Ogawa Y, Higashikuni Y, Kessinger CW, Jaffer FA, Michel T, Sata M, Croce K, Tanaka R, Arany Z.
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Journal Title
Cell Metab.
Volume: 19
Pages: 246-258
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Association of lower limb muscle mass and energy expenditure with visceral fat mass in healthy men.2014
Author(s)
Yagi S, Kadota M, Aihara K, Nishikawa K, Hara T, Ise T, Ueda Y, Iwase T, Akaike M, Shimabukuro M, Katoh S, Sata M.
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Journal Title
Diabetol Metab Syndr.
Volume: 6
Pages: 27
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Augmentation index does not reflect the risk of coronary artery disease in elderly patients.2014
Author(s)
Hayashi S, Yamada H, Bando M, Hotchi J, Ise T, Yamaguchi K, Iwase T, Soeki T, Wakatsuki T, Tamaki T, Sata M.
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Journal Title
Circ J.
Volume: 78
Pages: 1176-1182
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Acute pulmonary thromboembolism from deep vein thrombosis induced by trauma to the popliteal vein with a tennis racket.2014
Author(s)
Ise T, Iwase T, Masuda S, Yagi S, Akaike M, Nishio S, Niki T, Yamaguchi K, Taketani Y, Yamada H, Soeki T, Wakatsuki T, Sata M.
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Journal Title
JC Cases.
Volume: 9
Pages: 162-164
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Congenital long QT syndrome with compound mutations in the KCNH2 gene.2014
Author(s)
Bando S, Soeki T, Matsuura T, Niki T, Ise T, Yamaguchi K, Taketani Y, Iwase T, Yamada H, Wakatsuki T, Akaike M, Aiba T, Shimizu W, Sata M.
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Journal Title
Heart Vessels.
Volume: 29
Pages: 554-559
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Pre-load stress echocardiography for predicting the prognosis in mild heart failure.2014
Author(s)
Yamada H, Kusunose K, Nishio S, Bando M, Hotchi J, Hayashi S, Ise T, Yagi S, Yamaguchi K, Iwase T, Soeki T, Wakatsuki T, Sata M.
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Journal Title
JACC Cardiovasc Imaging.
Volume: 7
Pages: 641-649
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Pentraxin 3 is a local inflammatory marker in atrial fibrillation.2014
Author(s)
Soeki T, Bando S, Uematsu E, Matsuura T, Niki T, Ise T, Kusunose K, Hotchi J, Ueda Y, Tomita N, Yamaguchi K, Yagi S, Fukuda D, Taketani Y, Iwase T, Yamada H, Wakatsuki T, Shimabukuro M, Sata M.
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Journal Title
Heart Vessels.
Volume: 29
Pages: 653-658
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Cardiac rehabilitation reduces serum levels of oxidized low-density lipoprotein.2014
Author(s)
Takashima A, Ise T, Yagi S, Iwase T, Kimura S, Ueda Y, Nishikawa K, Ishii A, Niki T, Yamaguchi K, Taketani Y, Yamada H, Soeki T, Wakatsuki T, Katoh S, Akaike M, Sata M.
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Journal Title
Circ J.
Volume: 78
Pages: 2682-2687
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Serum concentration of eicosapentaenoic acid is associated with cognitive function in patients with coronary artery disease.2014
Author(s)
Yagi S, Hara T, Ueno R, Aihara K, Fukuda D, Takashima A, Hotchi J, Ise T, Yamaguchi K, Tobiume T, Iwase T, Yamada H, Soeki T, Wakatsuki T, Shimabukuro M, Akaike M, Sata M.
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Journal Title
Nutr J.
Volume: 13
Pages: 112
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Effect of ghrelin on autonomic activity in healthy volunteers.2014
Author(s)
Soeki T, Koshiba K, Niki T, Kusunose K, Yamaguchi K, Yamada H, Wakatsuki T, Shimabukuro M, Minakuchi K, Kishimoto I, Kangawa K, Sata M.
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Journal Title
Peptides.
Volume: 62
Pages: 1-5
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Presentation] 心腎連関と動脈硬化2015
Author(s)
佐田政隆
Organizer
第5回日本腎臓リハビリテーション学会
Place of Presentation
都市センターホテル(東京都千代田区)
Year and Date
2015-03-21 – 2015-03-22
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[Presentation] Association of CHADS2 and CHA2DS2-VASc scores with left atrial appendage dysfunction in patients with atrial fibrillation.2014
Author(s)
Bando M, Yamada H, Hotchi J, Hayashi S, Saijo Y, Takagawa Y, Sawada N, Nishio S, Hirata Y, Sata M.
Organizer
Euro Echo Imaging 2014
Place of Presentation
Reed Messe Wien - Messe Wien Exhibition & Congress Center(Vienna, Austria)
Year and Date
2014-12-03 – 2014-12-06
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[Presentation] Differential responses of local coagulation after implantation of second-generation drug-eluting stent compared with first-generation drug-eluting stents.2014
Author(s)
Yamazaki H, Wakatsuki T, Yamaguchi K, Imada K, Matsumoto K, Takagawa Y, Takagi E, Saijo Y, Hara T, Saito Y, Bando M, Takashima A, Bando S, Matsuura T, Ise T, Hotchi J, Tobiume T, Yagi S, Iwase T, Yamada H, Soeki T, Sata M.
Organizer
AHA Scientific Sessions 2014
Place of Presentation
McCormick Place(Chicago, America)
Year and Date
2014-11-15 – 2014-11-19
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[Presentation] Rivaroxaban, a direct factor Xa inhibitor, attenuates neointima formation after mechanical vascular injury.2014
Author(s)
Hara T, Fukuda D, Tanaka K, Higashikuni Y, Hirata Y, Yagi S, Yamada H, Soeki T, Wakatsuki T, Shimabukuro M, Sata M.
Organizer
AHA Scientific Sessions 2014
Place of Presentation
McCormick Place(Chicago, America)
Year and Date
2014-11-15 – 2014-11-19
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[Presentation] Differential response of local coagulation after implantation of new generation drug-eluting stents compared with sirolimus-eluting stent.2014
Author(s)
Yamaguchi K, Wakatsuki T, Takashima A, Bando M, Bando S, Matsuura T, Ise T, Hotchi J, Tobiume T, Yagi S, Iwase T, Yamada H, Soeki T, Sata M.
Organizer
AHA Scientific Sessions 2014
Place of Presentation
McCormick Place(Chicago, America)
Year and Date
2014-11-15 – 2014-11-19
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[Presentation] Genetic deletion of toll-like receptor 9 accelerates blood flow recovery after hindlimb ischemia.2014
Author(s)
Nishimoto S, Fukuda D, Higashikuni Y, Tanaka K, Hirata Y, Yagi S, Soeki T, Sakaue H, Shimabukuro M, Sata M.
Organizer
AHA Scientific Sessions 2014
Place of Presentation
McCormick Place(Chicago, America)
Year and Date
2014-11-15 – 2014-11-19
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[Presentation] Rivaroxaban, a direct factor Xa inhibitor, attenuates plaque progression and destabilization in ApoE-deficient mice by inhibiting macrophage activation.2014
Author(s)
Hara T, Fukuda D, Tanaka K, Higashikuni Y, Hirata Y, Yamada H, Soeki T, Wakatsuki T, Shimabukuro M, Sata M.
Organizer
ESC 2014
Place of Presentation
FIRA de Barcelona(Barcelona, Spain)
Year and Date
2014-08-29 – 2014-09-03
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[Presentation] Rivaroxaban, a direct factor Xa inhibitor, attenuates neointima formation following vascular injury in the mouse through the inhibition of proliferative activation of vascular smooth muscle cells.2014
Author(s)
Hara T, Fukuda D, Tanaka K, Higashikuni Y, Hirata Y, Yamada H, Soeki T, Wakatsuki T, Shimabukuro M, Sata M.
Organizer
ESC 2014
Place of Presentation
FIRA de Barcelona(Barcelona, Spain)
Year and Date
2014-08-29 – 2014-09-03
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[Presentation] Atrial late potentials and atrial substrate remodeling in patients with atrial fibrillation.2014
Author(s)
Bando S, Soeki T, Tobiume T, Matsuura T, Uematsu E, Fukuda D, Yamada H, Wakatsuki T, Shimabukuro M, Sata M.
Organizer
ESC 2014
Place of Presentation
FIRA de Barcelona(Barcelona, Spain)
Year and Date
2014-08-29 – 2014-09-03
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[Presentation] Combined administration of eicosapentaenoic acid and docosahexaenoic acid reduces atherosclerotic lesion in apolipoprotein E-deficient mice.2014
Author(s)
Takashima A, Fukuda D, Tanaka K, Higashikuni Y, Hirata Y, Yamada H, Soeki T, Wakatsuki T, Shimabukuro M, Sata M.
Organizer
ESC 2014
Place of Presentation
FIRA de Barcelona(Barcelona, Spain)
Year and Date
2014-08-29 – 2014-09-03
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[Presentation] Relationship between local production of microRNA-328 and atrial substrate remodeling in atrial fibrillation.2014
Author(s)
Soeki T, Uematsu E, Bando S, Matsuura T, Tobiume T, Fukuda D, Yamada H, Wakatsuki T, Shimabukuro M, Sata M.
Organizer
ESC 2014
Place of Presentation
FIRA de Barcelona(Barcelona, Spain)
Year and Date
2014-08-29 – 2014-09-03
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[Presentation] A renin inhibitor prevents atrial endocardial dysfunction in rapidly paced rats with streptozotocin-induced diabetes.2014
Author(s)
Matsuura T, Soeki T, Uematsu E, Bando S, Tobiume T, Fukuda D, Yamada H, Wakatsuki T, Shimabukuro M, Sata M.
Organizer
ESC 2014
Place of Presentation
FIRA de Barcelona(Barcelona, Spain)
Year and Date
2014-08-29 – 2014-09-03
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[Presentation] Predicting restenosis of coronary artery stents by ultrasound tissue characteristics of carotid artery plaque.2014
Author(s)
Bando M, Yamada H, Nishio S, Amano R, Hirata Y, Hotchi J, Saijo Y, Yamaguchi K, Soeki T, Wakatsuki T, Sata M.
Organizer
ASE 2014
Place of Presentation
Aros Congress Center(Vasteras, Sweden)
Year and Date
2014-06-20 – 2014-06-24
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[Presentation] Serial changes of exercise stress echocardiographic parameters in patients with connective tissue disease without overt pulmonary hypertension.2014
Author(s)
Hotchi J, Yamada H, Saijo Y, Bando M, Hayashi S, Nishio S, Yamano M, Torii Y, Hirata Y, Amano R, Ise T, Yamaguchi K, Tobiume T, Yagi S, Iwase T, Soeki T, Wakatsuki T, Sata M.
Organizer
ASE 2014
Place of Presentation
Aros Congress Center(Vasteras, Sweden)
Year and Date
2014-06-20 – 2014-06-24
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[Presentation] Relationships between 3-dimensional and 2-dimensional/doppler echocardiographic variables for evaluating right ventricular systolic function.2014
Author(s)
Yamada H, Akiyama S, Hotchi J, Bando M, Saijo Y, Nishio S, Yamano M, Torii Y, Hirata Y, Sata M.
Organizer
ASE 2014
Place of Presentation
Aros Congress Center(Vasteras, Sweden)
Year and Date
2014-06-20 – 2014-06-24
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[Presentation] Effects of oxidized cholesterol components in epicardial fat and atherosclerotic lesions in obese pigs fed high-fat diet: a gas chromatography-mass spectrometry analysis.2014
Author(s)
Shimabukuro M, Okawa C, Lei XF, Kim-Kaneyama JR, Yamada H, Kurobe H, Fukuda D, Takao S, Sato M, Sata M.
Organizer
EAS 2014
Place of Presentation
IFEMA(Madrid, Spain)
Year and Date
2014-05-31 – 2014-06-03
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[Presentation] 下肢静脈領域2014
Author(s)
西尾進、鳥居裕太、山田博胤、佐田政隆
Organizer
第87回日本超音波医学会学術集会
Place of Presentation
パシフィコ横浜(神奈川横浜市)
Year and Date
2014-05-09 – 2014-05-11
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