2014 Fiscal Year Annual Research Report
臨床応用を目的とした膵癌血管新生におけるPKDシグナルの分子生物学的役割の検討
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25293290
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| Research Institution | Nagoya City University |
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Principal Investigator |
松尾 洋一 名古屋市立大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (40381800)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
竹山 廣光 名古屋市立大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (00216946)
高橋 広城 名古屋市立大学, 医学(系)研究科(研究院), 講師 (30381792)
柴田 孝弥 名古屋市立大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (90592501)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | 膵癌 / 血管新生 / protein kinase D / 新規抗癌剤開発 / 胃癌 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
【目的】Protein Kinase D (PKD) はserine/threonine kinaseファミリーの一つで，細胞の増殖・成長に関与するといわれているが，消化器癌におけるPKDの具体的な役割と，PKD抑制による抗腫瘍効果は明らかでない．膵癌や胃癌におけるPKDの生物学的役割を検討した．【方法】（１）膵癌細胞株Panc-28を用いてPanc-28 mock，およびPanc-28 shPKD(PKD抑制株)を作成した．それにより両者の増殖，浸潤，血管新生能の変化をMTS-assay, invasion assay, Matrigel tube formation assayで比較検討した．（２）胃癌細胞株MKN45を用いてPMAでPKD活性を亢進し，血管新生因子(VEGFおよびIL-8)発現の変化を検討した（qPCR）．PKD inhibitor (CID 755637)を用いて，分泌が亢進した血管新生因子が抑制されることを確認した．【結果】（１）Panc-28 shPKDおよびPanc-28 mockのPKDの発現の差異をWestern blottingで確認し，Panc-28 shPKD でPKD発現が抑制されていることを確認した．PKDの抑制により，増殖能，浸潤能，血管新生能は抑制された．（２）MKN45をPMAで刺激することにより，血管新生因子VEGFおよびIL-8発現は亢進した．これは，PKD inhibitorによる抑制された．【結語】消化器癌において， PKDは増殖および腫瘍血管新生に関与しており，これの抑制が新たな抗腫瘍効果に結びつく可能性が示唆された．今後はin vivoでの検討を行う予定である．
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
消化器癌におけるPKD発現と増殖，血管新生の関連を，膵癌および胃癌細胞で確認できており，このシグナルの制御の治療への応用が期待できる．
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| Strategy for Future Research Activity |
PKDが血管新生におよぼす影響を多種の消化器癌で確認する．
in vivoで，PKD inhibitorが抗腫瘍効果を有することを確認する．
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| Causes of Carryover |
PKDの抗腫瘍効果を，in vitroでは血管新生に着目して，実験をすすめる必要がある．
in vivoでもPKDの抑制が抗腫瘍効果を有することを確認する必要がある．
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
1)PKDが血管新生に及ぼす影響の検討 in vitro angiogenesis assayを用いてPKDが癌細胞由来の血管新生因子VEGFおよびIL-8発現を亢進することにより，血管内皮細胞の管腔形成能を亢進することを確認する．また，PKD阻害薬でこれが抑制されることを確認する．
2)nude mice PKD抑制の抗腫瘍効果の検討(in vivo) 膵癌または胃癌細胞をnude miceに同所性に移植する．14日後から抗PKD低分子化合物(smi PKD: CID755673)を経口投与する．腫瘍サイズの変化を測定する. Ki-67染色，CD31染色，Tunel染色などの免疫染色を行い，apoptosisや血管新生などの関与を検討する．
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