熱帯地域に潜む未知の蚊媒介性ウイルスの網羅的探索

2015 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 25305015
• Research Institution: Nagasaki University
• Principal Investigator: 森田 公一 長崎大学, 熱帯医学研究所, 教授 (40182240)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 井上 真吾 長崎大学, 熱帯医学研究所, 助教 (00346925) ; 長谷部 太 長崎大学, 国際連携研究戦略本部, 教授 (20253693) ; 鍋島 武 長崎大学, 熱帯医学研究所, 助教 (30546859)
• Project Period (FY): 2013-04-01 – 2016-03-31
• Keywords: アルボウイルス / プロテオミクス / ゲノミクス

Outline of Annual Research Achievements

当初計画に従い、ケニア、ベトナム、フィリピン、加えて日本国内においてヒト、媒介蚊等の検体採取を実施した。得られた検体はデングウイルス等の既知の病原ウイルスについて、血清診断法、遺伝子増幅法等の手法により検査を実施した。陰性のサンプルについてはヒトスジシマカ培養細胞（Ｃ６／３６）やサル細胞（ＬＬＣ－ＭＫ２、SLAMノックインVero細胞）および、複数のヒト単核球系細胞に接種して1週間培養し細胞変性（ＣＰＥ）を指標にしてウイルス分離の有無を確認した。細胞変性が確認された培養液は再度培養細胞に接種してＣＰＥを確認できた場合に分離株として保存するとともに、一部サンプルは細胞培養液上清を濃縮して核酸を精製し、蛋白分画と合わせて長崎大学熱帯医学研究所に搬送しその後の解析を実施した。蛋白分画は日立社製のnLC/MS（質量分析計）にてアミノ酸配列情報を取得し、核酸分画はロッシュ社製の高性能シークエンサーにて解析し遺伝子配列の情報を取得しそれぞれマスコット解析とBLAST解析にて当初想定外ではあるが既知の、ナムディンウイルス、チクングニアウイルス、蚊フラビウイルスの分離が確認された。しかし、既存のデータベースでヒットしないアミノ酸配列と遺伝子配列は別途保存し、本プロジェクトで開発しているプロテオミクスとゲノミクスの未知配列データを比較解析する手法での未知ウイルス配列（塩基配列、残基配列）の検出プログラムを用いて新規ウイルスの可能性のある遺伝子配列とアミノ酸配列を抽出し、その情報からＰＣＲのプライマーを合成して、元のサンプル中に標的遺伝が存在するか否かを確認したのち、ジーンウオーキングにより2つの新規ウイルスゲノムの配列を確認した。さらにこれらのウイルスを検知するための高感度リアルタイムＰＣＲとＬＡＭＰ法を確立した。

Research Progress Status

27年度が最終年度であるため、記入しない。

Strategy for Future Research Activity

27年度が最終年度であるため、記入しない。

Causes of Carryover

27年度が最終年度であるため、記入しない。

Expenditure Plan for Carryover Budget

27年度が最終年度であるため、記入しない。

Research Products

• [Journal Article] Tofla virus: A newly identified Nairovirus of the Crimean-Congo hemorrhagic fever group isolated from ticks in Japan. (2016)
  • Author(s): Shimada S, Aoki K, Nabeshima T, Fuxun Y, Kurosaki Y, Shiogama K, Onouchi T, Sakaguchi M, Fuchigami T, Ono H, Nishi K, Posadas-Herrera G, Uchida L, Takamatsu Y, Yasuda J, Tsutsumi Y, Fujita H, Morita K, Hayasaka D,
  • Journal Title: Sci Rep. Volume: 11 Pages: 20213-20213
  • DOI: 10.1038/srep20213
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Isolation of dengue serotype 3 virus from the cerebrospinal fluid of an encephalitis patient in Hai Phong, Vietnam in 2013. (2015)
  • Author(s): Phu Ly MH, Takamatsu Y, Nabeshima T, Pham Hoai LL, Pham Thi H, Dang Thi D, Nguyen NL, Nguyen Thi TT, Le Thi QM, Buerano CC, Morita K, Hasebe F.
  • Journal Title: J Clin Virol. Volume: 70 Pages: 93-96
  • DOI: 10.1016/j.jcv.2015.07.295.
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Molecular epidemiology of Japanese encephalitis in northern Vietnam, 1964-2011: genotype replacement. (2015)
  • Author(s): Do LP, Bui TM, Hasebe F, Morita K, Phan NT.
  • Journal Title: Virol J. Volume: 12 Pages: 51-51
  • DOI: 10.1186/s12985-015-0278-4
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Detection of Chikungunya Virus in Nepal. (2015)
  • Author(s): Pandey BD, Neupane B, Pandey K, Tun MM, Morita K.
  • Journal Title: Am J Trop Med Hyg. Volume: 93(4) Pages: 697-700
  • DOI: 10.4269/ajtmh.15-0092.
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Presentation] Tofla virus: a new Nairovirus belonging to the Crimean-Congo hemorrhagic fever group isolated from ticks in Japan. (2015)
  • Author(s): Satoshi Shimada, Kotaro Aoki, Takeshi Nabeshima, Yu Fuxun, Yohei Kurosaki, Kazuya Shiogama, Takanori Onouchi, Miako Sakaguchi, Posadas-Herrera Guilermo, Leo Uchida, Yuki Takamatsu, Jiro Yasuda, Yutaka Tsutsumi, Hiromi Fujita, Kouichi Morita, Daisuke Hayasaka.
  • Organizer: The 63rd Annual Meeting of the Japanese Society for Virology.
  • Place of Presentation: 福岡国際会議場（福岡県・福岡市）
  • Year and Date: 2015-11-22 – 2015-11-24
• [Presentation] Dengue outbreak in Myanmar 2013: A decade persistence of predominant dengue virus serotype 1. (2015)
  • Author(s): Ngwe Tun Mya Myat, Kyaw Aung Kyaw, Nader Makki, Rohitha Muthugala, Takeshi Nabeshima, Shingo Inoue, Daisuke Hayasaka, Myat Thwe Saw Zin, Kouichi Morita.
  • Organizer: The 63rd Annual Meeting of the Japanese Society for Virology.
  • Place of Presentation: 福岡国際会議場（福岡県・福岡市）
  • Year and Date: 2015-11-22 – 2015-11-24
• [Presentation] A dengue virus serotype 4 dominant outbreak in central Vietnam, 2013. (2015)
  • Author(s): Nguyen Thi Thu Thuy, Yuki Takamatsu, Dang thi Dinh, Nguyen Nam Lien, Dang Hoai Linh Ly, Pham Thi Hang, Bui Thu Thuy, Takeshi Nabeshima, Le Quynh Mai, Kouichi Morita, Futoshi Hasebe.
  • Organizer: The 63rd Annual Meeting of the Japanese Society for Virology.
  • Place of Presentation: 福岡国際会議場（福岡県・福岡市）
  • Year and Date: 2015-11-22 – 2015-11-24
• [Presentation] Production, characterization and diagnostic application of monoclonal antibodies against yellow fever virus. (2015)
  • Author(s): Fernand Adungo, Yu Fusun, David Kamau, Inoue Shingo, Hayasaka Daisuke, Guillemo Pasadas-Herrera, Rosemary Sang, Mwau Matilu, Morita Kouich.
  • Organizer: The 14th Awaji International Forum on Infection and Immunity.
  • Place of Presentation: 淡路夢舞台国際会議場（兵庫県・淡路市）
  • Year and Date: 2015-09-08 – 2015-09-11
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] 国内のマダニから分離された新規ナイロウイルス. (2015)
  • Author(s): 嶋田聡, 青木康太郎, 鍋島武, 余福勲, 黒崎陽平, 塩竈和也, 尾之内高慶, 坂口美亜子, 淵上剛, 小野北斗, 西弘大, Guillermo Posadas-Herrera, 内田玲麻, 高松由基, 安田二朗, 堤寛, 藤田博己, 森田公一, 早坂大輔.
  • Organizer: 第52回日本ウィルス学会九州支部総会.
  • Place of Presentation: 別府ビーコンプラザ 中会議室（大分県・別府市）
  • Year and Date: 2015-09-04 – 2015-09-05
• [Presentation] 国内のマダニから分離された新規ナイロウイルス. (2015)
  • Author(s): 嶋田聡, 青木康太郎, 鍋島武, 余福勲, 黒崎陽平, 塩竈和也, 尾之内高慶, 坂口美亜子, 淵上剛, 小野北斗, 西弘大, Guillermo Posadas-Herrera, 内田玲麻, 高松由基, 安田二朗, 堤寛, 藤田博己, 森田公一, 早坂大輔.
  • Organizer: 第50回日本脳炎ウイルス生態学研究会.
  • Place of Presentation: ホテル京都エミナース（京都府・京都市）
  • Year and Date: 2015-05-15 – 2015-05-16
• [Presentation] ケニアにおけるチクングニアの発生報告. (2015)
  • Author(s): 井上真吾, Caloline Wsonga, James Kimotho, 森田公一, Rosemary Sang, Lilian Musila.
  • Organizer: 第50回日本脳炎ウイルス生態学研究会.
  • Place of Presentation: ホテル京都エミナース（京都府・京都市）
  • Year and Date: 2015-05-15 – 2015-05-16