肺がん化学療法における交流磁場併用療法の開発

2013 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 25350578
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• Research Institution: Kanazawa Medical University
• Principal Investigator: 小林 誠 金沢医科大学, 医学部, 助教 (20460355)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 柿川 真紀子 金沢大学, 環日本海域環境研究センター, 助教 (10359713) ; 山田 外史 金沢大学, 環日本海域環境研究センター, 教授 (80019786)
• Project Period (FY): 2013-04-01 – 2016-03-31
• Keywords: VLF-EMF

Research Abstract

本年度の目標は、培養細胞を用いた実験系の確立としている。本年度は培養細胞用磁場曝露装置を用いた生細胞数測定・アポトーシス試験の実験系の確認および次年度実施予定試験の準備にあたる遺伝子クローニングを行なった。
１．ヒト正常気管支上皮細胞（BEAS-2B）、ヒト肺腺がん由来細胞（A549）およびヒトTリンパ細胞（Jurkat）を用いた、交流磁場曝露が培養細胞に与える影響および磁場曝露併用によるシスプラチン薬理作用増強効果の測定　　呼吸器系上皮細胞とTリンパ細胞の3細胞株を用いて、商用交流周波数（60Hz）磁束密度最大50mTの交流磁場を印加したときの細胞障害性を生細胞数測定（MTT法）およびアポトーシス試験（アネキシンV-ヨウ化プロピジウム法）にて解析した。
２．シスプラチン耐性を安定的に示す培養細胞株の樹立　　これまでの大腸菌を用いた検討では交流磁場曝露併用によりシスプラチン殺細胞効果が増強した。そのメカニズムとして細胞膜透過性の亢進を考えている。シスプラチン耐性のメカニズムには薬剤の細胞内取り込みおよび排出を担うトランスポーター異常などが知られており、本研究期間内にはこれら遺伝子発現を改変した薬剤耐性培養細胞の樹立を目指している。本年度はトランスポーターを含む4遺伝子（全てヒト遺伝子）をクローニングした。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

１．培養細胞を用いた実験系の確立　　呼吸器系上皮細胞（BEAS-2B, A549）とTリンパ細胞（Jurkat）の3細胞を対象にした磁場曝露影響を測定する実験系を確立した。生細胞数測定には、MTTおよびヨウ化プロピジウム（PI）を用いた実験系を採用した。アポトーシス解析はアネキシンV-FITCにて初期アポトーシスを検出する実験系を採用した。交流磁場（60Hz, 50mT）磁場曝露における上記3細胞に対する細胞障害性の有無および磁場曝露併用がシスプラチン薬理作用に与える影響についての予備検討を行なった。実験系の確立において、初年度の目標は概ね達成したと考える。
２． シスプラチン耐性を安定的に示す培養細胞株の樹立
本年度は薬剤耐性に関与する4遺伝子をクローニングした。薬剤耐性遺伝子のクローニングにおいて、初年度の目標は概ね達成したと考える。

Strategy for Future Research Activity

１．呼吸器系上皮細胞（BEAS-2B, A549）とTリンパ細胞（Jurkat）の3細胞を用いた磁場曝露併用による薬理作用増強効果の測定　　今年度実施の予備検討結果をもとにシスプラチンの薬理作用増強効果をより強く示す磁場曝露条件を決定し結果を得る。
２．シスプラチン耐性培養細胞株の樹立　　これまでにクローニングした薬剤耐性遺伝子を安定株作成用発現ベクターまたはノックアウトベクターに導入し、BEAS-2B細胞に形質転換することでシスプラチン耐性培養細胞株を作成する。
３．シスプラチン耐性培養細胞株を用いた磁場曝露併用による薬理作用増強効果の測定　　作成したシスプラチン耐性細胞株を用いて、上記１．と同様に結果を求める。これにより遺伝的背景による磁場曝露影響の比較を行う。

Expenditure Plans for the Next FY Research Funding

研究分担者実施中の新規交流磁場曝露装置の作成において、部品調達の遅れがあるため。
新規装置作成のための部品購入代金に使用する。

Research Products

• [Journal Article] A three-microphone acoustic reflection technique using transmitted acoustic waves in the airway. (2013)
  • Author(s): Fujimoto Y, Huang J, Fukunaga T, Kato R, Higashino M, Shinomiya S, Kitadate S, Takahara Y, Yamaya A, Saito M, Kobayashi M, Kojima K, Oikawa T, Nakagawa K, Tsuchihara K, Iguchi M, Takahashi M, Mizuno S, Osanai K, Toga H
  • Journal Title: Journal of Applied Physiology Volume: 115 Pages: 1119-1125
  • DOI: 10.1152/japplphysiol.00326.2013
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] アデノベクターによるラット肺へのリソフォスファチジルコリンアシル転移酵素1（LPCAT1）遺伝子デリバリーはオレイン酸肺傷害を抑制する (2013)
  • Author(s): 周 敏, 長内和弘, 北楯祥子, 四宮祥平, 東野茉莉, 山谷淳代, 高原 豊, 齋藤雅俊, 小林 誠, 及川 卓, 中川 研, 土原一真, 水野史朗, 黄 正寿, 栂 博久
  • Journal Title: 分子呼吸器病 Volume: 17 Pages: 143-145
• [Presentation] 気管原発リンパ上皮腫様癌の一例 (2013)
  • Author(s): 東野茉莉, 加藤 諒, 高原 豊, 山谷淳代, 齋藤雅俊, 小島好司, 小林 誠, 藤本由貴, 及川 卓, 中川 研, 水野史朗, 長内和弘, 栂 博久
  • Organizer: 第71回呼吸器合同北陸地方会
  • Place of Presentation: 富山（ボルファートとやま）
  • Year and Date: 20131109-20131110
• [Presentation] Gene polymorphisms of p53 at aodon 72 and MDM2 SNP309 regulates lung cell proliferation during hypoxia. (2013)
  • Author(s): S.Mizuno, T.Ishizaki, M.Kobayashi, K.Osanai, H.Toga
  • Organizer: VIII Congress of euro-asian respiratory society international symposium
  • Place of Presentation: Bishkek, Kyrgyzstan
  • Year and Date: 20131107-20131109
• [Presentation] すりガラス影を呈したIgG4関連肺疾患の一例 (2013)
  • Author(s): 宮下久範, 東野茉莉, 齋藤雅俊, 加藤 諒, 北楯祥子, 四宮祥平, 高原 豊, 山谷淳代, 小島好司, 小林 誠, 藤本由貴, 及川 卓, 中川 研, 水野史朗, 長内和弘, 栂 博久
  • Organizer: 第70回呼吸器合同北陸地方会
  • Place of Presentation: 新潟（新潟ユニゾンプラザ）
  • Year and Date: 20130601-20130602
• [Presentation] 気管支拡張症に合併した肺ノカルジア症の１例 (2013)
  • Author(s): 野尻正史, 齋藤雅俊, 加藤 諒, 北楯祥子, 四宮祥平, 東野茉莉, 高原 豊, 山谷淳代, 小林 誠, 小島好司, 藤本由貴, 及川 卓, 中川 研, 水野史朗, 長内和弘, 栂 博久
  • Organizer: 第70回呼吸器合同北陸地方会
  • Place of Presentation: 新潟（新潟ユニゾンプラザ）
  • Year and Date: 20130601-20130602
• [Presentation] 健常女性に発症した肺Mycobacterium heckeshornense 感染症と考えられた１例 (2013)
  • Author(s): 平場友子, 藤本由貴, 加藤 諒, 東野茉莉, 四宮祥平, 北楯祥子, 高原 豊, 山谷淳代, 齋藤雅俊, 小林 誠, 小島好司, 及川 卓, 中川 研, 高橋昌克, 水野史朗, 長内和弘, 栂 博久, 飯沼由嗣
  • Organizer: 第70回呼吸器合同北陸地方会
  • Place of Presentation: 新潟（新潟ユニゾンプラザ）
  • Year and Date: 20130601-20130602
• [Presentation] 睡眠時無呼吸症候群（OSA）における夜間副交感神経機能の評価 (2013)
  • Author(s): 藤本由貴, 黄 正寿, 加藤 諒, 東野茉莉, 四宮祥平, 北楯祥子, 高原 豊, 山谷淳代, 齋藤雅俊, 小林 誠, 小島好司, 及川 卓, 中川 研, 土原一真, 水野史朗, 長内和弘, 栂 博久
  • Organizer: 第53回日本呼吸器学会学術講演会
  • Place of Presentation: 東京・千代田区（東京国際フォーラム）
  • Year and Date: 20130419-20130421
• [Presentation] 覚醒時の鼻咽頭と舌根部咽頭腔の病態と睡眠時無呼吸の関係 (2013)
  • Author(s): 小島好司, 黄 正寿, 加藤 諒, 東野茉莉, 四宮祥平, 北楯祥子, 高原 豊, 齋藤雅俊, 小林 誠, 藤本由貴, 及川 卓, 中川 研, 土原一真, 水野史朗, 長内和弘, 栂 博久
  • Organizer: 第53回日本呼吸器学会学術講演会
  • Place of Presentation: 東京・千代田区（東京国際フォーラム）
  • Year and Date: 20130419-20130421
• [Presentation] 頚部の経皮的持続陰圧吸引による睡眠時無呼吸患者の上気道開存性の変化 (2013)
  • Author(s): 齋藤雅俊, 黄 正寿, 福永壽晴, 加藤 諒, 四宮祥平, 北楯祥子, 東野茉莉, 小林 誠, 小島好司, 藤本由貴, 及川 卓, 中川 研, 土原一真, 水野史朗, 長内和弘, 栂 博久
  • Organizer: 第53回日本呼吸器学会学術講演会
  • Place of Presentation: 東京・千代田区（東京国際フォーラム）
  • Year and Date: 20130419-20130421